豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究.pdf

1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究StudyonSecretoryProteinsofStrePtocoeeusSuisSerotyPe2atDifferentTemPerature研究生:謝春艷導(dǎo)師:金梅林指導(dǎo)小組:金梅林陳煥春郭愛(ài)珍銳斌周吳劉正飛曹勝波教授教授院士教授教授教授副教授副教授專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:病原微生物及蛋白質(zhì)組學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大

2、學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二00八年六月豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究2實(shí)驗(yàn)材料..............................................................................................................……232.1菌株及培養(yǎng)基……，......................................................

3、..................................……232.2主要實(shí)驗(yàn)儀器...............................................................................................……232.3主要化學(xué)試劑.................................................................

4、..............................……232.4主要溶液配方...............................................................................................……243方法...........................................................................

5、...........................................……263.1PCR鑒定菌株毒力因子..............................................................................……263.1.1引物的設(shè)計(jì)與合成................................................................

6、.................……263.1.2PCR反應(yīng)程序.......................................................................................……273.2SC一21菌株的培養(yǎng)條件................................................................................…

7、…273.3分泌蛋白樣品的制備...................................................................................……273.4THB培養(yǎng)基蛋白樣品的制備..........................................................……，.....……273.5蛋白定量.........................

8、..............................................................................……283.5.1精確定量:QuantityKit定量..............................................................……283.5.2粗略定量:Bradfd法................................

9、.........................................……283.6IDSDS一PAGE電泳.，.............................................................……，...............……283.7雙向聚丙烯酞胺凝膠電泳(2D一隊(duì)GE)........……，........................……，..........……283

10、.7.11EF..........................................................................................................……283.7.2IPG膠條平衡.........................................................................................……

11、293.7.3灌制凝膠................................................................................................……303.7.4膠條的轉(zhuǎn)移............................................................................................……303.7

12、.5打開(kāi)循環(huán)水浴........................................................................................……303.7.6參數(shù)設(shè)置................................................................................................……303.7.7凝膠染色(銀

13、染)................................................................................……303.8圖像掃描及分析...........................................................................................……313.9差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的鑒定.................

14、..................................................................……313.9.1切取蛋白點(diǎn)............................................................................................……313.9.2膠內(nèi)酶解...................................

15、.............................................................……313.9.3LCESI一MSMS質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)搜索.............................................……犯3.10實(shí)時(shí)熒光定量PCR.....................................................................

16、...............……323.10.1基本原理.......................……，................................................................……323.10.2總RNA的提取....................................................................................

17、……333.10.3cDNA的合成....................……，............................................................……343.10.4引物的合成..........................................................................................……343.10.5實(shí)時(shí)熒光定