鴨腸炎病毒gC和gE優(yōu)勢抗原表位的篩選.pdf

1、鴨病毒性腸炎(DVE),又名鴨瘟(DP),是由鴨腸炎病毒(DEV)引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病,具有流行廣泛,傳播迅速,發(fā)病率和死亡率高等特征。該病在世界范圍內(nèi)的發(fā)生和流行給水禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。gC和gE是鴨腸炎病毒的兩種主要囊膜蛋白,其中g(shù)C具有良好的免疫原性和抗原性以及刺激機(jī)體T細(xì)胞增殖的功能,gE含有中和抗原表位,蛋白胞外區(qū)和胞內(nèi)區(qū)均具有良好的抗原性,并且可以參與病毒吸附和病毒在細(xì)胞與細(xì)胞

2、間直接傳播的過程。本研究利用大腸桿菌pET-32a表達(dá)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)了截短蛋白的融合表達(dá),結(jié)合蛋白質(zhì)印跡技術(shù),篩選出DEVgC和gE的優(yōu)勢抗原表位,從而對DEV的主要抗原結(jié)構(gòu)有了進(jìn)一步的認(rèn)識,為亞單位疫苗及診斷試劑的研制提供基本的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 為了分析鴨腸炎病毒gC和gE的優(yōu)勢抗原表位區(qū),分別設(shè)計(jì)了7個覆蓋gC胞外區(qū)和7個覆蓋gE胞外區(qū)和胞內(nèi)區(qū)的多肽片段,進(jìn)行融合表達(dá),經(jīng)Westernblot分析表明gC-1(27-96aa),

3、gC-2(74-149aa),gE-5(241-325aa),gE-7(433-490aa)能夠被DEV陽性血清所識別。為了進(jìn)一步鑒定鴨腸炎病毒gC和gE的優(yōu)勢抗原表位區(qū),進(jìn)行了第二輪的抗原表位篩選,結(jié)果顯示gC-2.1(67-104aa),gE-5.3(290-325aa),gE-7.3(449-475aa),gE-7.4(463-490aa)具有良好的抗原性。在此基礎(chǔ)上,又進(jìn)行了第三輪的抗原表位篩選,分別設(shè)計(jì)了5個覆蓋gC-2.1、

4、5個覆蓋gE-5.3和6個覆蓋gF-7.3和gE-7.4的多肽片段,每個多肽片段合成一對寡聚核酸片段,經(jīng)磷酸化退火后插入表達(dá)載體pET-32a進(jìn)行融合表達(dá)及純化,經(jīng)Westernblot鑒定具有抗原性的片段為:gC-2.1-B(73-88aa)、gC-2.1-C(79-94aa)、gE-5.3-B,gE-5.3-C(296-315aa)和gE-7.3-B～7.4-B(455-485aa)。最后,為了進(jìn)一步縮小鴨腸炎病毒gC和gE的優(yōu)勢抗

5、原表位區(qū)的氨基酸數(shù),進(jìn)行了第四輪的篩選,Westernblot結(jié)果顯示,鴨腸炎病毒gC的優(yōu)勢抗原表位區(qū)位于N端的73-88aa處;gE的優(yōu)勢抗原表位區(qū)位于303-313aa、317-326aa.和461-481aa處。
　　 在確定鴨腸炎病毒gC和gE的優(yōu)勢抗原表位區(qū)的基礎(chǔ)上,利用DNAMAN序列分析軟件將DEVgC和gE的抗原表位區(qū)與其他公布的DEV序列進(jìn)行比對,結(jié)果顯示:篩選出的優(yōu)勢抗原表位區(qū)高度保守,這為進(jìn)一步了解DEV抗