PKG、PKA在糖尿病胃動(dòng)力障礙大鼠胃平滑肌中的表達(dá).pdf

1、糖尿病胃腸動(dòng)力障礙是糖尿病常見的并發(fā)癥之一。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者中，約有75％的患者可出現(xiàn)腹脹，腹部不適，等胃腸癥狀。糖尿病上胃腸運(yùn)動(dòng)障礙、胃排空延緩可引起血糖水平不穩(wěn)定，但是到現(xiàn)在為止，不完全清楚糖尿病造成的胃腸動(dòng)力障礙的發(fā)生機(jī)理。
　　利尿鈉肽（natriuretic peptides，NPs）和NO是PKG上游的信號(hào)分子。NPs或一氧化氮作用于膜結(jié)合型鳥苷酸環(huán)化酶(particulate guanylate cycla

2、se，pGC)或胞漿可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(soluble guanylate cyclase，sGC)，生成環(huán)磷酸鳥苷，環(huán)磷酸鳥苷作用于 PKG，組成 NPs/NO-cGMP-PKG，這一通路在調(diào)節(jié)平滑肌動(dòng)力過程中起重要的作用。
　　細(xì)胞內(nèi)有Ser／Thr蛋白激酶——環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate，cAMP)依賴的蛋白激酶（cAMP dependent protein kinase，PKA）

3、，它的功能是作用于底物蛋白，使其發(fā)生磷酸化，改變細(xì)胞的功能。cAMP作用于PKA后，PKA進(jìn)一步可通過下游的其它途徑，對(duì)平滑肌起松馳作用。
　　胃腸道內(nèi)有非常豐富的旁分泌、自分泌活性細(xì)胞。我們之前的研究指出，在糖尿病大鼠胃竇平滑肌細(xì)胞 PKG的上游 CNP-B型利尿鈉肽受體（B-type natriuretic peptide receptor，NPR-B）/pGC-cGMP信號(hào)通路活性被上調(diào)，NPR-B表達(dá)明顯增加，pGC活性也

4、明顯增強(qiáng)，cGMP明顯增多。這種病理生理改變很可能在糖尿病胃動(dòng)力障礙發(fā)生發(fā)展中起重要作用，而且，在胃平滑肌通過CNP激活生成的cGMP可通過cGMP-磷酸二酯酶3（Phosphodiesterase，PDE3）-cAMP信號(hào)通路，使組織中 cAMP水平升高。此外，還觀察到糖尿病組大鼠胃平滑肌，經(jīng)CNP處理后，不僅cGMP濃度明顯高于正常對(duì)照組、而且cAMP濃度也明顯高于正常對(duì)照組。此結(jié)果提示，糖尿病大鼠胃平滑肌中 CNP-cGMP信號(hào)轉(zhuǎn)

5、導(dǎo)通路上調(diào)時(shí)，被上調(diào)的cGMP通過cGMP-PDE3-cAMP下游信號(hào)通路，抑制PDE3的活性，從而增加胃平滑肌細(xì)胞中 cAMP濃度，這些結(jié)果表明，在糖尿病大鼠胃平滑肌cGMP和cAMP信號(hào)通路均明顯上調(diào)，那么PKG和PKA兩種酶的表達(dá)是否會(huì)有變化？因此，我們通過 STZ制造糖尿病大鼠模型，研究了糖尿病大鼠胃竇平滑肌中PKG和PKA的病理生理改變。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1．利用Western blot方法觀察PKG蛋白在

6、糖尿病大鼠胃平滑肌組織中的分布結(jié)果：PKG蛋白表達(dá)的相對(duì)值在正常對(duì)照組為0.075±0.008，在糖尿病組為0.148±0.009。統(tǒng)計(jì)分析后，糖尿病組與正常對(duì)照組比較，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=9，P<0.05）； PKG蛋白表達(dá)在糖尿病組高于正常對(duì)照組。
　　2．利用RT-PCR方法觀察糖尿病大鼠胃平滑肌組織PKGmRNA表達(dá)結(jié)果：PKG mRNA擴(kuò)增條帶的相對(duì)量，在正常對(duì)照組為0.44±0.08，在糖尿病組為0.84

7、±0.19。統(tǒng)計(jì)分析后，糖尿病組與正常對(duì)照組比較，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=9，P<0.05）； PKG mRNA表達(dá)在糖尿病組高于正常對(duì)照組。
　　3．利用Western blot方法觀察PKA蛋白在糖尿病大鼠胃平滑肌組織中的分布結(jié)果：PKA蛋白表達(dá)的相對(duì)值在正常對(duì)照組為0.124±0.006，在糖尿病組為0.214±0.012。統(tǒng)計(jì)分析后，糖尿病組與正常對(duì)照組比較，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=9，P<0.05）；

8、 PKA蛋白表達(dá)在糖尿病組高于正常對(duì)照組。
　　4．利用RT-PCR方法觀察糖尿病大鼠胃平滑肌組織PKA mRNA表達(dá)結(jié)果：PKA mRNA擴(kuò)增條帶的相對(duì)量，在正常對(duì)照組0.32±0.08，在糖尿病組為0.78±0.12。統(tǒng)計(jì)分析后，糖尿病組與正常對(duì)照組比較，有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=9，P<0.05）； PKA mRNA表達(dá)在糖尿病組高于正常對(duì)照組。
　　以上結(jié)果提示：
　　1．糖尿病大鼠胃平滑肌PKG蛋白及