外源性SCF對糖尿病胃輕癱大鼠胃竇平滑肌RhoA-ROCK信號通路的影響.pdf

1、研究背景及目的：糖尿病胃輕癱(diabetic gastroparesis，DGP)是糖尿病常見的消化道并發(fā)癥之一。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)：外源性SCF通過改善或逆轉(zhuǎn)DGP大鼠胃竇Cajal細(xì)胞病變，部分改善其胃動力，但在DGP大鼠中存在胃電-機(jī)械失偶聯(lián)的現(xiàn)象，提示DGP大鼠胃竇平滑肌本身可能存在異常，但機(jī)制尚不清楚。RhoA/ROCK信號通路是一種Ca2+非依賴性的平滑肌收縮調(diào)節(jié)機(jī)制，與血管平滑肌、膀胱平滑肌、子宮平滑肌等的異常收縮有關(guān)，

2、DGP的發(fā)生是否與RhoA/ROCK信號通路有關(guān)，目前尚不清楚。本研究旨在探討外源性SCF改善DGP大鼠胃動力是否與胃竇平滑肌RhoA/ROCK信號通路有關(guān)。
　　方法：
　　1、SD大鼠30只，隨機(jī)分為對照組和糖尿病組(DM組)。DM組采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)50mg/Kg，同時聯(lián)合高糖高脂飼料規(guī)律喂養(yǎng)建立DGP大鼠模型，對照組采用腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)并普通飼

3、料喂養(yǎng)。
　　2、10周后將DM組隨機(jī)分為DGP組(n=9)和DGP+SCF組(n=9)，DGP+SCF組給予腹腔注射SCF0.4μg/(Kg·d)×20天，對照組和DGP組腹腔注射等量的磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)，共20天。
　　3、干預(yù)結(jié)束后2天，用胃內(nèi)色素殘留率測定胃排空時間；RT-PCR、免疫組化和Western blot方法檢測大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA mRNA及蛋白表達(dá)水平；RT-PCR、免疫組化檢測大鼠胃

4、竇平滑肌組織中ROCK1 mRNA、ROCK2 mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立DGP大鼠模型；DGP組大鼠胃排空時間明顯高于對照組(52.53％±4.38％vs38.57％±2.39％，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃排空時間明顯低于DGP組(45.77％±3.89％vs52.53％±4.38％，P<0.05)。
　　2、DGP組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA mRNA的表達(dá)較對照組顯著降低

5、(0.511+0.128 vs0.979±0.150，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA mRNA的表達(dá)明顯高于DGP組(0.780±0.164 vs0.511±0.128，P<0.05)。
　　3、免疫組化檢測顯示：DGP組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA蛋白表達(dá)較對照組顯著降低(0.0819±0.0377 vs0.2020±0.0428，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA蛋白表達(dá)

6、明顯高于DGP組(0.1098±0.0434 vs0.0819±0.0377，P<0.05)；Western blot檢測顯示：DGP組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA蛋白表達(dá)較對照組顯著降低(0.676±0.186 vs1.084±0.103，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃竇平滑肌組織中RhoA蛋白表達(dá)明顯高于DGP組(0.905±0.167 vs0.676±0.186，P<0.05)。
　　4、DGP組大鼠胃竇平滑肌組織中

7、ROCK1、ROCK2 mRNA的表達(dá)較對照組顯著降低(0.724±0.098 vs0.975±0.110，P<0.05；0.234±0.067 vs0.773±0.161，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃竇平滑肌組織中ROCK1、ROCK2mRNA的表達(dá)明顯高于DGP組(0.906±0.123 vs0.724±0.098，P<0.05；0.463±0.086 vs0.234±0.067，P<0.05)。
　　5、免疫組化檢

8、測顯示：DGP組大鼠胃竇平滑肌組織中ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)較對照組顯著降低(0.1021±0.0321 vs0.4321±0.0446，P<0.05；0.2037±0.0367 vs0.3672±0.0421，P<0.05)；DGP+SCF組大鼠胃竇平滑肌組織中ROCK1、ROCK2蛋白表達(dá)明顯高于DGP組0.2456±0.0372 vs0.1021±0.0321，P<0.05；0.2923±0.0431 vs0.2037±0.