肝素修飾的脂質(zhì)微體內(nèi)應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　 1、制備出小批量性質(zhì)穩(wěn)定的肝素修飾的脂質(zhì)微泡，并對其質(zhì)量進(jìn)行初步評價(jià)。
　　 2、探討肝素修飾的脂質(zhì)微泡對正常大鼠心肌灌注效果。
　　 3、建立一種理想的急性心肌梗塞大鼠模型，探討肝素修飾的脂質(zhì)微泡對缺血心肌灌注研究的可行性和準(zhǔn)確性。
　　 4、以酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF)為模型藥物，運(yùn)用超聲爆破微泡介導(dǎo)技術(shù)研究aFGF治療大鼠心肌缺血，探討其促進(jìn)大鼠缺血心肌血管新生的可行性，為肝素

2、結(jié)合生長因子類藥物治療冠心病提供一個(gè)新的途徑和手段。
　　 方法：
　　 1、應(yīng)用自制肝素-泊洛沙姆復(fù)合材料對脂質(zhì)微泡進(jìn)行表面修飾，將磷脂材料、乳化劑（吐溫-80）、凍干支撐劑（Poloxamer188）、自制肝素-泊洛沙姆按照一定比例經(jīng)冷凍干燥法制備成肝素修飾化脂質(zhì)微泡，并對脂質(zhì)微泡凍干粉形態(tài)及復(fù)溶性、微泡濃度、脂質(zhì)微泡形態(tài)、脂質(zhì)微泡粒徑及粒徑分布等指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。
　　 2、運(yùn)用造影數(shù)據(jù)相關(guān)分析軟件，對正常

3、大鼠心肌超聲造影圖像所獲參數(shù)始增時(shí)間、峰值時(shí)間、峰值強(qiáng)度進(jìn)行時(shí)間-強(qiáng)度曲線定量分析，評估心肌超聲造影參數(shù)的準(zhǔn)確性。
　　 3、通過SD大鼠心梗前和心梗后，以及連續(xù)4周的超聲經(jīng)胸追蹤觀察，以超聲技術(shù)評價(jià)心梗大鼠心功能的結(jié)果作參考，分析了心梗大鼠與假手術(shù)組大鼠在心功能等臨床參數(shù)上的差別；通過時(shí)間-強(qiáng)度分析軟件對缺血心肌超聲造影圖像進(jìn)行增強(qiáng)時(shí)間、峰值時(shí)間和峰值強(qiáng)度定量分析。
　　 4、通過超聲介導(dǎo)酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFG

4、F)治療心肌缺血大鼠并觀察療效，于藥物治療4周后處死大鼠，免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測缺血心肌周圍CD34的表達(dá)，并在顯微鏡下計(jì)數(shù)心肌內(nèi)新生微血管密度(Microvesseldensity,MVD)。
　　 結(jié)果：
　　 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選得出：肝素-泊洛沙姆可用于制備脂質(zhì)微泡；當(dāng)磷脂材料、乳化劑、凍干支撐劑比例為2:5:50時(shí)，HP與Poloxamer188的質(zhì)量比1：19時(shí)，脂質(zhì)微泡的質(zhì)量最好。優(yōu)選出的肝素修飾的脂質(zhì)微

5、泡具有良好的外觀及復(fù)溶性，脂質(zhì)微泡濃度可達(dá)3.5×108個(gè)/ml，90％以上粒徑在2～8μm，微泡穩(wěn)定性良好。
　　 2、正常大鼠心肌部位顯影參數(shù)平均結(jié)果：始增時(shí)間是4.4s，峰值強(qiáng)度59.1dB、峰值時(shí)間5.1s。
　　 3、造模后心肌缺血大鼠體表心動(dòng)圖ST段明顯抬高，出現(xiàn)大范圍的心肌缺血心電圖改變；造模4周后行超聲檢查，心肌缺血大鼠心臟室壁變薄、心腔擴(kuò)大，M型超聲心動(dòng)圖示室壁運(yùn)動(dòng)減弱，左心收縮功能指標(biāo)EF明顯降低；病

6、理組織學(xué)檢查可見心肌缺血大鼠心肌變性、壞死，缺血區(qū)被纖維組織替代填充。心梗組大鼠與假手術(shù)組大鼠比較：始增時(shí)間、峰值強(qiáng)度、峰值時(shí)間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、IHC結(jié)果顯示，CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞膜和胞漿，顯示為棕黃色或棕褐色顆粒，新生的微血管被染成棕黃色，顯微鏡下計(jì)數(shù)每高倍鏡視野下的MVD，結(jié)果表明在US+MB+aFGF組心肌中MVD最高，為266.9士39.83(個(gè)/高倍鏡視野)，與其它各組相比較均有顯著

7、性差異((P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、采用冷凍干燥法可成功制備肝素修飾的脂質(zhì)微泡，其粒徑大小符合靜脈注射要求。
　　 2、應(yīng)用超聲顯像技術(shù)觀察全過程，體內(nèi)造影顯示該微泡能夠有效增強(qiáng)大鼠心肌實(shí)質(zhì)回聲，肝素修飾的脂質(zhì)微泡可作為造影劑具有心肌顯影的可行性。
　　 3、確定了結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法并成功制各了大鼠心肌缺血模型，建立了常規(guī)超聲測量、病理組織形態(tài)學(xué)等一系列綜合評價(jià)心肌缺血模型的指標(biāo)。