藍(lán)狐多重感染的病原學(xué)及主要病原的分子生物學(xué)特性研究.pdf

1、近年來，隨著我國毛皮動物規(guī)模化養(yǎng)殖業(yè)的不斷擴(kuò)大，由病原細(xì)菌所引起的狐類感染，常表現(xiàn)出流行面廣、發(fā)病率和死亡率高的特點(diǎn)。傳染性疾病，尤其是細(xì)菌性疾病的多重感染發(fā)生日益頻繁、越來越普遍，給毛皮動物養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重地威脅到毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展。2006-2007年間，山東6個(gè)地區(qū)不同狐群養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的母狐出現(xiàn)空懷、流產(chǎn)、出血性肺炎等癥狀病變類似的疫情。為了進(jìn)一步探討引起這場規(guī)?；鼒霭l(fā)生疾病的原因，本研究開展了流行病學(xué)調(diào)查

2、，病原學(xué)檢查，細(xì)菌多重感染的狀況分析及間接熒光抗體檢測等方法的建立，并對其主要病原進(jìn)行16SrRNA序列測定和系統(tǒng)進(jìn)化性分析，為規(guī)?；N狐場多重感染的疾病診斷與防治提供了理論依據(jù)。 本研究共分三部分： 一、規(guī)?；{(lán)狐養(yǎng)殖場細(xì)菌感染的病原學(xué)檢測及其多重感染的狀況分析2006-2007年間，山東6個(gè)地區(qū)不同狐群養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的母狐出現(xiàn)空懷、流產(chǎn)、出血性肺炎等癥狀病變類似的疫情，給養(yǎng)殖場造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。通過對其養(yǎng)殖場(共計(jì)飼養(yǎng)

3、藍(lán)狐2.2萬余只)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，對送檢的236只病死藍(lán)狐進(jìn)行細(xì)菌和病毒學(xué)檢查，及犬瘟熱(CDV)、犬細(xì)小病毒(CPV)快速診斷試紙條的檢測，從被檢病料中主要分離到綠膿桿菌(86％)、大腸桿菌(34.3％)、沙門氏菌(25.8％)和普通變形桿菌(8.5％)四種病原菌，病毒檢查與試紙條檢測皆為陰性，人工感染小鼠的致病性試驗(yàn)結(jié)果表明四種病原菌皆為致病菌：通過細(xì)菌分離率及共感染率的統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)病狐群同時(shí)存在大腸桿菌、沙門氏菌、普通變形桿菌

4、和綠膿桿菌的二重感染(45.8％)、三重感染(3.8％)、甚至四重感染(0.4％)的情況，尤其是以綠膿桿菌感染為主的多重感染，已成為影響山東地區(qū)毛皮動物養(yǎng)殖疫病的主要病因之一。 二、藍(lán)狐綠膿桿菌主要血清學(xué)診斷方法的建立與臨床應(yīng)用取上述試驗(yàn)所分離的主要病原菌綠膿桿菌的代表菌株ZB4，分別制備全菌(OK)抗原及菌體(O)抗原，經(jīng)分別強(qiáng)化免疫接種家兔制備高效價(jià)抗血清，進(jìn)行與待檢菌株的玻片凝集反應(yīng)、免疫熒光抗體反應(yīng)(IFA)及瓊脂擴(kuò)散試

5、驗(yàn)(AGP)等方面的免疫檢驗(yàn)，結(jié)果在同種細(xì)菌間的熒光抗體檢驗(yàn)顯示出了特異的黃綠色熒光反應(yīng)；玻片凝集反應(yīng)中出現(xiàn)了特異凝集；在瓊脂擴(kuò)散檢驗(yàn)中出現(xiàn)特異的免疫沉淀線。本研究建立了藍(lán)狐綠膿桿菌玻板凝集、IFA、AGP的快速診斷方法，補(bǔ)充了傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)檢測的方法，為這些病原的快速、準(zhǔn)確診斷奠定了基礎(chǔ)。 三、藍(lán)狐綠膿桿菌ZB4株16SrRNA基因的序列測定及系統(tǒng)進(jìn)化分析病原學(xué)研究結(jié)果表明綠膿桿菌是影響規(guī)?；{(lán)狐養(yǎng)殖場多重感染的主要病原之一，為進(jìn)

6、一步研究其分子生物學(xué)特性，本試驗(yàn)利用原核生物16SrRNA基因通用引物對分離純化的藍(lán)狐致病性綠膿桿菌菌株ZB4進(jìn)行16SrRNA基因的克隆及序列分析。采用DNAstar軟件將獲得的序列與選取的核苷酸同源性較高的序列進(jìn)行同源性比對，采用MEGA(3.1)軟件生成同源序列的進(jìn)化樹。結(jié)果顯示該菌株與假單胞菌屬的9個(gè)代表菌株的同源性均很高，在98.7％～99.2％之間，在所構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹上，ZB4菌株與綠膿桿菌(Pseudomonasaeru