甘肅省昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)分子生物學(xué)鑒定.pdf

1、昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)是一類(lèi)寶貴的天敵資源，對(duì)農(nóng)、林及衛(wèi)生害蟲(chóng)的綜合治理、環(huán)境保護(hù)以及實(shí)現(xiàn)農(nóng)田生物多樣性，都具有重要的學(xué)術(shù)和實(shí)用價(jià)值。目前，國(guó)內(nèi)、外對(duì)昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)的分類(lèi)研究主要集中在形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)等方面，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)線蟲(chóng)系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行研究還處在起步階段。 本研究應(yīng)用PCR擴(kuò)增并測(cè)定了根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定方法鑒定出的在甘肅省采集的29個(gè)不同地理群體8種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)的rDNA序列，獲得26S DNA基因約1100bp長(zhǎng)度的序列片段，結(jié)果顯示

2、所測(cè)定的序列都具有較強(qiáng)的系統(tǒng)發(fā)育信號(hào)。鑒定結(jié)果與實(shí)驗(yàn)室采用形態(tài)學(xué)方法對(duì)這些線蟲(chóng)進(jìn)行詳細(xì)鑒定所得的結(jié)果完全一致。 鑒于線蟲(chóng)混合蟲(chóng)口問(wèn)題和種間差異不顯著等特點(diǎn)，本研究摸索出單條線蟲(chóng)PCR擴(kuò)增的成熟條件對(duì)全部29個(gè)地理群體的線蟲(chóng)樣品ITS區(qū)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，結(jié)合Genbank上的昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)序列做出了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。 用Alul限制性內(nèi)切酶對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了RFLP分析，結(jié)果表明：不同地理種群的線蟲(chóng)ITS區(qū)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度均在1100b

3、p左右，酶切圖譜種間差異不大，也不存在種內(nèi)群體的變異多態(tài)性。 本研究提供了一個(gè)對(duì)大量昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)樣本進(jìn)行快速初步鑒定的方法，對(duì)昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)資源調(diào)查和分子系統(tǒng)學(xué)等方面的研究具有重要意義。 對(duì)在甘肅省采集的8種昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)進(jìn)行了抗干燥能力測(cè)定，結(jié)果表明：昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)種類(lèi)不同，其抗干燥能力也不同。在25℃、相對(duì)濕度50．5%的小空間控制器中分別處理5小時(shí)、7小時(shí)和9小時(shí)后，斯氏線蟲(chóng)仍具有較高的存活率，而異小桿類(lèi)線蟲(chóng)幾乎全部死亡