過繼轉(zhuǎn)移日本血吸蟲感染小鼠CD8α-樹突狀細(xì)胞通過IL-10抑制OVA誘導(dǎo)的過敏性哮喘.pdf

1、目的：
　　探究日本血吸蟲（SJ）感染小鼠哪種樹突狀細(xì)胞（DC）亞群對(duì)抑制OVA誘導(dǎo)的過敏性哮喘有關(guān)鍵作用，并研究其抑制作用的機(jī)制。
　　方法：
　　取SJ感染小鼠和正常小鼠各10只，采用MACS方法從脾臟中提取CD8α+DC和CD8α-DC，分別表示為：NCD8α+DC，NCD8α-DC,SJCD8α+DC，SJCD8α-DC。
　　另取24只小鼠，隨機(jī)分為4組：Normal組、Asthma組、SJCD8α+組

2、和SJCD8α-組。SJCD8α+組：過繼轉(zhuǎn)移SJCD8α+DC后，用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠；SJCD8α-組：過繼轉(zhuǎn)移SJCD8α-DC后，用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠；Asthma組：不過繼轉(zhuǎn)移DC,僅與SJCD8α+組和SJCD8α-組小鼠在同一時(shí)間用OVA誘發(fā)哮喘的小鼠；Normal組：正常對(duì)照小鼠，不過繼轉(zhuǎn)移 DC,也不誘發(fā)哮喘。對(duì) SJCD8α+組、SJCD8α-組和Asthma組小鼠誘發(fā)哮喘結(jié)束后，處死各組小鼠。
　　1.取

3、肺組織，制作石蠟切片，H&E染色后,觀察各組小鼠肺組織病理變化。
　　2.分別提取NCD8α+DC，NCD8α-DC,SJCD8α+DC，SJCD8α-DC的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用q-PCR的方法檢測(cè)DC亞群IL-12和IL-10 mRNA水平。
　　3.收集各組小鼠的支氣管肺泡灌洗液（BALF），用 ELISA法檢測(cè)各組小鼠BALF中IL-10蛋白水平。
　　4.取各組小鼠脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，在一定濃度O

4、VA的刺激下，對(duì)脾細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。72h后，收集脾細(xì)胞培養(yǎng)上清（SCS），用 ELISA方法檢測(cè)各組小鼠SCS中IL-10蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　1.與 Asthma組小鼠相比，SJCD8α+組小鼠肺組織病理性炎癥減輕：肺間質(zhì)仍有炎細(xì)胞浸潤，支氣管管腔可見黏液潴留，但管壁較完整，增厚不明顯。然而，與Asthma組和SJCD8α+組小鼠相比，SJCD8α-組小鼠肺組織病理性炎癥明顯減輕：肺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤明顯減輕，支氣管

5、管壁完整，增厚不明顯，管腔內(nèi)黏液潴留少見。過繼轉(zhuǎn)移 SJCD8α-DC對(duì)過敏性哮喘的抑制作用強(qiáng)于SJCD8α+DC。
　　2. NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-12 mRNA水平分別為23.14±0.40、18.74±2.92、37.96±1.36和25.34±4.31（GAPDH％），SJCD8α-DC IL-12 mRNA表達(dá)水平低于SJCD8α+DC（P<0.01），與NCD

6、8α+DC、NCD8α-DC相比無明顯差異。NCD8α+DC、NCD8α-DC、SJCD8α+DC和SJCD8α-DC的IL-10 mRNA水平分別為79.74±1.39、89.50±13.95、103.17±3.69和172.68±29.39（GAPDH%），SJCD8α-DC IL-10 mRNA表達(dá)水平高于NCD8α-DC和SJCD8α+DC（P<0.05，P<0.05）。
　　3. Normal組、Asthma組、SJCD

7、8α+組和SJCD8α-組小鼠SCS中IL-10蛋白水平分別為（142.23±11.96）pg/ml、（164.42±26.47）pg/ml、（254.16±26.28） pg/ml和（841.53±9.49）pg/ml。SJCD8α-組小鼠SCS中IL-10蛋白表達(dá)水平明顯高于Normal組、Asthma組和SJCD8α+組（P<0.001，P<0.001，P<0.001）。
　　4. Normal組、Asthma組、SJCD8

8、α+組和SJCD8α-組小鼠BALF中IL-10蛋白水平分別為（151.63±10.40）pg/ml、（144.54±10.18）pg/ml、（202.88±30.98） pg/ml和（411.21±7.81）pg/ml。SJCD8α-組BALF中IL-10蛋白水平明顯高于Normal組、Asthma組和SJCD8α+組（P<0.001，P<0.001，P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　1. SJCD8α-DC對(duì)OVA誘導(dǎo)