過敏性哮喘氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與IL-10及IL-17水平變化的研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　過敏性哮喘在近幾年發(fā)病率有增高趨勢(shì)。研究顯示，過敏性哮喘是由多種細(xì)胞及細(xì)胞因子參與的一種頑固性慢性呼吸道疾病，以氣道高反應(yīng)性和氣道重構(gòu)為主要特征，氣道炎癥是過敏性哮喘的基本病理改變。氣道炎癥表現(xiàn)為炎性細(xì)胞在氣道浸潤(rùn)聚集，炎性細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等，此外還有多種細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)。
　　大量文獻(xiàn)表明免疫細(xì)胞及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子在哮喘的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，其中以C

2、D4+T細(xì)胞亞群（Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性CD4+T細(xì)胞）比例的改變和IL-5、IL-10、IL-17等細(xì)胞因子的變化尤為突出。IL-10通過對(duì)炎癥細(xì)胞活化、增殖和細(xì)胞因子分泌的直接抑制作用，抑制 T細(xì)胞應(yīng)答和特異性IgE分泌，而抑制氣道炎癥，最終起到抑制過敏性哮喘的作用。Th17的主要作用與炎癥相關(guān)，Th17通過分泌炎癥性細(xì)胞因子 IL-17而發(fā)揮作用。IL-17引起中性粒細(xì)胞的聚集和集落刺激因子的分泌，又可以促進(jìn)生成粒細(xì)胞，

3、與一些自身免疫性疾病及炎癥反應(yīng)的發(fā)作與其有密切關(guān)系。近年來一個(gè)研究熱點(diǎn)的是Th17細(xì)胞及 IL-17因子與慢性炎癥疾病及自身免疫性疾病的關(guān)系。研究表明，中性粒細(xì)胞數(shù)量及血清 IL-17水平與過敏性哮喘患者及重癥患者的炎癥嚴(yán)重程度成正相關(guān)，可能患者的氣道高反應(yīng)也與之有關(guān)。臨床上使用糖皮質(zhì)激素治療時(shí)可以明顯減輕患者的氣道炎癥。IL-17導(dǎo)致氣道局部炎癥持久存在或范圍擴(kuò)大是過敏性哮喘的發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵因素。
　　為進(jìn)一步探討過敏性哮喘氣

4、道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，本課題以臨床過敏性哮喘患者為研究對(duì)象，收集肺泡灌洗液（BALF）并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類，使用流式細(xì)胞儀對(duì)外周血中單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的 Th1、Th2及Th17細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，使用酶聯(lián)免疫和熒光定量PCR對(duì)外周血中的IL-10及IL-17水平和PBMC中的IL-10 mRNA以及IL-17 mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)。研究過敏性哮喘患者氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)后 IL-10及 IL-17的變化，為過敏性哮喘臨床的

5、診斷治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1．研究對(duì)象：分為兩組。哮喘組哮喘組為記錄完整的未經(jīng)過規(guī)范化治療的30例過敏性哮喘患者，對(duì)照組為年齡相仿的正常健康志愿者30例。
　　2．肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞檢測(cè)：收集肺泡灌洗液，離心，取沉渣進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞分類。
　　3．肺泡灌洗液上清IgE水平檢測(cè)：收集肺泡灌洗液，離心，取上請(qǐng)，使用ELISA法檢測(cè)IgE水平。
　　4．血清IL-10、IL-17水平檢測(cè)：抽取外周

6、血，分離血清，使用ELISA法對(duì)IL-10及IL-17水平進(jìn)行測(cè)定。
　　5．外周血PBMC中的IL-10及IL-17 mRNA檢測(cè)：抽取外周血，分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），提取RNA，使用PCR熒光定量對(duì)IL-10及IL-17 mRNA進(jìn)行測(cè)定。
　　6．外周血PBMC Th1、Th2及Th17細(xì)胞亞群測(cè)定：使用流式細(xì)胞儀分析外周血PBMC中的Th1、Th2及Th17細(xì)胞亞群。
　　結(jié)果：
　　1.哮喘組 BA

7、LF中細(xì)胞總數(shù)46.45±4.07較對(duì)照組0.95±0.89多，淋巴細(xì)胞百分比（78.05±4.39）％明顯高于對(duì)照組（0.20±0.52）%，嗜酸性粒細(xì)胞百分比（19.75±3.20）%明顯高于對(duì)照組（0.10±0.22）%，且兩組之間都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.哮喘組BALF中IgE水平7.56±2.01明顯高于對(duì)照組2.68±1.32，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.哮喘組血清 IL-10水平8.64±0.98與對(duì)照

8、組25.05±1.29相比有所下降，而哮喘組血清 IL-17水平7.67±2.35顯著高于與對(duì)照組2.97±1.40。哮喘組外周血PBMC中的IL-10 mRNA水平0.384±0.459與對(duì)照組0.876±0.512相比有所下降,哮喘組外周血 PBMC中的 IL-17 mRNA水平0.674±0.481顯著升高與對(duì)照組0.289±0.265，哮喘組與對(duì)照組相比都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.哮喘組外周血 PBMC中的 CD4+IL-4

9、+細(xì)胞水平10.79±2.16與對(duì)照組4.11±1.03相比明顯升高，同時(shí) CD4+IL-17A+細(xì)胞水平3.94±0.59與對(duì)照組1.13±0.59相比明顯升高，而 CD4+IFN-γ+細(xì)胞水平2.68±1.32與對(duì)照組13.57±3.56比較明顯的降低，兩者相比都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　過敏性哮喘氣道炎性細(xì)胞浸潤(rùn)伴隨肺泡灌洗液炎性細(xì)胞增加、IgE水平增高和 Th2、Th17細(xì)胞增加，因此，IL-10和 IL-1