宿主因子SGTA通過與流感病毒M2蛋白互作促進(jìn)病毒復(fù)制.pdf

1、流感病毒是引起人類流行性感冒的病原體。近年來隨著流感病毒的流行，新的變異株不斷產(chǎn)生，宿主范圍不斷擴(kuò)大，病毒的致病性和傳播能力也有不斷增強(qiáng)的趨勢，對公共衛(wèi)生安全的危害日趨嚴(yán)重。流感病毒結(jié)構(gòu)簡單，基因組較小，可以通過移碼及可變剪接等方式表達(dá)多種蛋白，但在宿主體內(nèi)，仍需要借助宿主的蛋白質(zhì)合成及運(yùn)輸系統(tǒng)、能量系統(tǒng)和可變剪接系統(tǒng)等完成自身的復(fù)制。另一方面，流感病毒入侵宿主后，可以被宿主的免疫系統(tǒng)識別，宿主免疫相關(guān)蛋白可以通過與病毒蛋白的相互作用，

2、限制流感病毒的復(fù)制。由此可見流感病毒與宿主的相互作用是一個非常復(fù)雜的過程，深入研究宿主蛋白與流感病毒蛋白的相互作用，對于理解流感病毒的復(fù)制機(jī)制和致病機(jī)理，從而實現(xiàn)流感的有效防控至關(guān)重要。
　　流感病毒M2蛋白是一個多功能的蛋白分子，它的離子通道活性可以在病毒復(fù)制早期介導(dǎo)病毒脫殼從而使核糖核蛋白復(fù)合體(vRNP)具備入核能力，也可以在反式高爾基體中協(xié)助HA蛋白成熟。另外，M2蛋白在病毒復(fù)制后期促進(jìn)子代病毒粒子出芽釋放。鑒于M2蛋白在

3、流感病毒復(fù)制周期中具有重要作用，本實驗室前期利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與M2蛋白相互作用的宿主因子，其中之一為Small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing proteinα(SGTA)。本研究通過酵母回交驗證表明SGTA蛋白與M2蛋白可以在酵母系統(tǒng)中發(fā)生相互作用，免疫共沉淀實驗證實M2蛋白與SGTA在293T細(xì)胞中存在互作，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)SGTA蛋白C端91-313位氨基酸

4、是與M2蛋白互作的關(guān)鍵區(qū)域。激光共聚焦實驗結(jié)果顯示外源轉(zhuǎn)染的SGTA蛋白和M2蛋白主要共定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。過表達(dá)SGTA蛋白可以促進(jìn)流感病毒復(fù)制，而siRNA下調(diào)SGTA蛋白表達(dá)或CRISPR-Cas9敲除SGTA后則顯著抑制流感病毒復(fù)制，由此可見，SGTA蛋白對流感病毒復(fù)制發(fā)揮正調(diào)控作用。在此基礎(chǔ)上，我們發(fā)現(xiàn)siRNA干擾下調(diào)表達(dá)SGTA后不影響病毒NP蛋白進(jìn)入細(xì)胞核，表明SGTA蛋白不影響流感病毒早期復(fù)制。重要的是，我們發(fā)現(xiàn)SGTA蛋