Th17細胞與Treg細胞在聚乙二醇干擾素治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎過程中的作用研究.pdf

1、HBV感染是世界范圍內(nèi)重大的健康問題之一，部分的乙肝病毒感染者最終發(fā)展為肝硬化或肝癌。前期的研究認為在慢性乙型肝炎的發(fā)展過程中細胞免疫發(fā)揮了重要作用，尤其是HBV特異性的CD4+T以及CD8+T細胞在對HBV感染的控制中起至關(guān)重要的作用。隨著免疫學研究的進展，越來越多的免疫細胞被發(fā)現(xiàn)，它們通過復(fù)雜的機制，在慢性乙型肝炎的發(fā)生發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮著重要作用。Th17和Treg細胞是兩種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞群，在功能上分別為促進和抑

2、制免疫應(yīng)答，研究發(fā)現(xiàn)在正常情況下兩種細胞處于一種免疫平衡狀態(tài)，但我們前期的研究結(jié)果顯示在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)這種平衡被打破。本實驗旨在探索聚乙二醇干擾素治療慢性乙肝的過程中，T輔助細胞(Th1、Th2、Th17和Treg細胞)的變化特征以及在抗病毒治療過程中的動態(tài)變化規(guī)律，并分析Th17/Treg細胞免疫平衡在HBV持續(xù)感染的過程中所發(fā)揮的作用。
　　方法：
　　選取未經(jīng)抗HBV治療的HBeAg+慢性乙型肝炎患者11例，按常

3、規(guī)劑量和方法給予聚乙二醇干擾素抗病毒治療48w，收集患者在基線、治療4、8、12、24、32、40、48周時的外周血，采用流式抗體進行細胞膜表面和胞內(nèi)染色技術(shù)，運用流式細胞儀對其單個核細胞(PBMC)中Th1、Th2、Th17、Treg等細胞的表達水平進行動態(tài)檢測，同時在每個治療時間點檢測受試者的相關(guān)臨床指標(ALT，HBV-DNA，TB及乙肝表面標志物等)，分析在抗病毒治療過程中各細胞的變化趨勢，并觀察相互之間是否具有相關(guān)性，及與HB

4、V-DNA定量和ALT水平之間是否具有相關(guān)性。同時選取健康志愿者20例作為對照組。
　　結(jié)果：
　　1.干擾素治療過程各時間點外周血Th17、Treg、Th1、Th2細胞的變化趨勢：在治療前8周，Th17細胞呈上升趨勢，在8周至40周期間呈現(xiàn)為折線形波動，至48周時又出現(xiàn)緩慢升高。Treg細胞則于前4周快速升高，4周到8周時又迅速下降，前8周內(nèi)以第4周為分界出現(xiàn)倒”V”形變化，隨后呈緩慢波動，無明顯升降趨勢。在治療過程中，T

5、h17細胞在4周、8周、48周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，其中24周時的表達頻率較基線相比差異更為明顯(p<0.01)。Treg細胞僅治療4周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。在干擾素治療前4周，Th1細胞呈快速下降趨勢，治療4-24周期間，其表達出現(xiàn)緩慢波動，24周后又呈現(xiàn)出明顯升高趨勢，至40周后則快速下降，Th2細胞在治療過程中表現(xiàn)為水平狀波動趨勢，無明顯變化。在治療過程中，Th1

6、細胞在4周、8周、12周、24周、48周時的表達頻率與基線相比有明顯統(tǒng)計學差異(p<0.001)，治療32周、40周時的表達頻率較基線相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。Th2細胞在治療8周、24周、40周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。統(tǒng)計結(jié)果顯示，Th17細胞在CHB患者中的表達頻率明顯高于健康對照組(p<0.05)，Th2細胞在CHB組中的表達明顯高于HC組(p<0.05)。CHB組中的Th17/Treg

7、比率與HC組相比明顯升高(p<0.01)，Th1/Th2細胞比率與HC組相比降低(p<0.05)。
　　2.以治療48周時HBeAg下降至1COI為界分為eAg陽性組(>1COI)和eAg轉(zhuǎn)換組(<1COI)，分析eAg血清學轉(zhuǎn)換患者及eAg陽性患者外周血各細胞比例的差異：在干擾素治療前4周，兩組中的Th1細胞均呈現(xiàn)明顯下降趨勢，在治療4周到40周期間表現(xiàn)為波動狀上升趨勢，至治療48周時，兩組中Th1細胞的表達又迅速降低，整體表現(xiàn)

8、為下降趨勢，兩組沒有明顯差別(p<0.05)。在治療前8周，eAg轉(zhuǎn)換組中。Th2細胞呈明顯上升趨勢，之后出現(xiàn)緩慢波動，至治療40周后明顯下降，eAg陽性組則始終表現(xiàn)為水平波動趨勢，至治療40周后，也表現(xiàn)為明顯下降。在治療前8周，兩組中Th17細胞均表現(xiàn)為明顯上升趨勢，之后eAg陽性組繼續(xù)出現(xiàn)上升趨勢，至治療24周后明顯下降，eAg轉(zhuǎn)換組則始終呈水平波動趨勢，兩組在治療48周時Th17細胞的比例達到相似水平。在治療前4周，兩組中Treg

9、細胞呈明顯上升趨勢，之后兩組均呈現(xiàn)波動狀下降趨勢。
　　3.在peg-IFN治療過程中外周血中各細胞比例與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性分析：經(jīng)Pearson correlation統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示Th1與Treg細胞比例在基線時表現(xiàn)為顯著正相關(guān)性(p<0.001)，TH2與TH17細胞在基線時也表現(xiàn)為正相關(guān)(p<0.05)，在治療過程中Th17與Treg細胞、Th1與Th2細胞的變化均呈相反趨勢，Th17細胞與Treg細胞在治

10、療24周、32周時呈負相關(guān)性(p<0.05)，Th1細胞與Th2細胞在治療24周時表現(xiàn)為負相關(guān)(p<0.05)。在治療12周及24周時，Th17/Treg比例與HBV-DNA之間呈負相關(guān)(p<0.05)，Th1/Th2比例與HBV-DNA之間無明顯相關(guān)性，Th1細胞與Th17細胞在治療12周時均與HBV-DNA定量間存在正相關(guān)性(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)，Th17細胞處于功能活躍狀態(tài)，而Tre