蜂蜜中雷公藤甲素檢測方法及貯藏過程中降解規(guī)律研究.pdf

1、蜂蜜作為天然甜味食品，因具有良好營養(yǎng)價值和保健功能深受人們喜愛。但是近年來，在我國南方部分省市，陸續(xù)報道爆發(fā)了多起因食用蜂蜜而中毒的事件，使人們對蜂蜜的安全性產(chǎn)生了一定的擔(dān)憂。本研究通過對疑似有毒蜂蜜樣本的分析，發(fā)現(xiàn)這些樣本含有一定濃度的雷公藤甲素。雷公藤甲素是雷公藤屬植物中特有的成分，具有較強的生理活性及毒性，鑒于此，可以將雷公藤甲素作為有毒蜂蜜潛在的特征標志物之一，用于鑒別有毒蜂蜜并可作為快速診斷有毒蜂蜜中毒患者的依據(jù)。建立蜂蜜中雷

2、公藤甲素的高靈敏度和特異性檢測方法，是開展疑似有毒蜂蜜鑒別及其風(fēng)險評估的技術(shù)保障。目前蜂蜜中雷公藤甲素檢測方法相對匱乏，為此，本論文通過優(yōu)化不同的樣品前處理過程，利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行測定，建立了兩種不同蜂蜜中雷公藤甲素的檢測方法，并基于建立的檢測方法考察了蜂蜜中雷公藤甲素在不同貯藏溫度下的降解情況。主要研究結(jié)果為以下三部分。
　　1.通過優(yōu)化儀器參數(shù)（如流動相、色譜柱等參數(shù)，以及質(zhì)譜的碰撞電壓、離子對等參數(shù)）建立雷公藤

3、甲素的儀器條件。優(yōu)化樣品前處理過程（提取溶劑、凈化劑等）建立蜂蜜中雷公藤甲素定量分析的前處理方法。最終選取乙酸乙酯為提取劑，采用兩步提取合并提取液的提取方法從蜂蜜中提取出雷公藤甲素，利用自配的凈化劑組合包（C18、PSA、中性氧化鋁）進行凈化，并上機分析測定。結(jié)果表明:雷公藤甲素在5.0～1000.0μg/L范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999。在5.0，10.0，50.0，100.0μg/kg四個濃度水平下進行添加回收率試驗，

4、雷公藤甲素的基質(zhì)回收率在80％～102％范圍內(nèi)，日內(nèi)RSD小于8％，日間RSD不超過13％，方法的定量限為5.0μg/kg，檢出限為2.0μg/kg。這表明本章所建立的方法可用于蜂蜜中雷公藤甲素的定性和定量分析，且方法具有定性和定量準確、穩(wěn)定，操作簡便的特點。
　　2.建立柱前衍生/超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中雷公藤甲素的定量分析方法。本部分主要是基于改進QuEChERS的前處理方法，對雷公藤甲素的衍生化條件（衍生劑、衍生溫

5、度、衍生時間、衍生劑濃度等）進行優(yōu)化，最終確定樣品前處理過程。并對雷公藤甲素衍生物的儀器方法進行優(yōu)化。結(jié)果表明:雷公藤甲素衍生物添加入蜂蜜空白基質(zhì)中而繪制成的基質(zhì)標準曲線在1.0-100.0μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。加標回收試驗通過基質(zhì)標準曲線定量發(fā)現(xiàn)，在三個濃度1.0，10.0，100.0μg/mL添加水平下，蜂蜜中雷公藤甲素的回收率范圍在79％～94％之間，精密度為2.9％～5.8％，準確度為6.9％～10.3％，定量限1.0μ

6、g/kg，檢出限0.3μg/kg。因此本方法不僅定量限低，而且穩(wěn)定可靠，可用于準確定性和定量分析蜂蜜中的雷公藤甲素。
　　3.研究了雷公藤甲素以及其在蜂蜜貯藏過程中的降解規(guī)律，試驗表明不管是否有蜂蜜基質(zhì)的存在，雷公藤甲素的降解規(guī)律和溫度有密切關(guān)系，其降解速度隨溫度的升高而加快。在日常生活中，蜂蜜往往是放置于35℃、20℃、4℃這三種溫度條件下的，通過試驗，我們發(fā)現(xiàn)蜂蜜中的雷公藤甲素在35℃條件下放置了六個月，其濃度降解了約50％;