京尼平抑制UCP2在大鼠再生肝抗CCL4損傷中的作用.pdf

1、目的:解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)是線粒體內(nèi)膜解偶聯(lián)蛋白質(zhì)家族成員。因其解偶聯(lián)效應(yīng)可降低細(xì)胞線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的質(zhì)子梯度,減少活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生。根據(jù)我們以前的研究顯示,UCP2在再生肝表達(dá)顯著增加,提示UCP2可能參與了再生肝的自身保護(hù)作用。本研究通過制備再生肝模型,應(yīng)用UCP2的特異抑制劑京尼平,觀察UCP2在大鼠再生肝抗CCl4損傷中的作用。

2、>　　 方法:健康雄性SD大鼠110只,隨機(jī)分為六組:假手術(shù)組(SO)、肝切組(PH)、假手術(shù)損傷組(SO+CCl4)、肝切損傷組(PH+CCl4)、京尼平處理肝切組(PH+G)和京尼平處理肝切損傷組(PH+G+CCh)。按照Aderson和Higgins方法行大鼠2/3肝部分切除手術(shù)(partial hepatectomy,PH)。對(duì)進(jìn)行肝切手術(shù)的大鼠于術(shù)后84小時(shí)及95小時(shí)給予UCP2特異性抑制劑京尼平處理,每只大鼠按京尼平20m

3、g/Kg腹腔注射。之后應(yīng)用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)做肝毒劑腹腔注射處理。HE染色觀察肝臟組織形態(tài)的改變;檢測大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine amiotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;檢測肝組織氧化應(yīng)激指標(biāo)如丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SO

4、D)的含量;免疫組化方法觀察肝臟組織UCP2蛋白表達(dá)的改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.HE染色結(jié)果顯示:假手術(shù)組肝細(xì)胞形態(tài)正常,排列有序,中央靜脈周圍肝索排列緊密,肝小葉結(jié)構(gòu)完整;肝切組細(xì)胞輕度腫脹,可見少量核分裂相,肝索結(jié)構(gòu)清楚,肝小葉結(jié)構(gòu)完整;假手術(shù)損傷組大鼠肝組織在中央靜脈和小葉下靜脈周圍肝組織可見點(diǎn)狀壞死和出血、肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變,細(xì)胞境界不清,細(xì)胞腫脹渾濁,可見大量炎細(xì)胞浸潤,肝小葉結(jié)構(gòu)破壞,條索狀排列消失,門

5、管區(qū)肝細(xì)胞可見明顯的水樣變性、脂肪變性和嗜酸變性。肝切損傷組肝小葉結(jié)構(gòu)較為完整、破壞較輕,條索狀排列保留,可見肝細(xì)胞出現(xiàn)輕度的水樣性變、脂肪性變和嗜酸性變,肝組織局部區(qū)域有炎細(xì)胞浸潤,無肝細(xì)胞壞死。京尼平處理肝切組大鼠的肝細(xì)胞細(xì)胞輕度腫脹,有少量核分裂相,肝索結(jié)構(gòu)尚清晰;京尼平處理肝切損傷組多數(shù)細(xì)胞形態(tài)正常,可見少量炎性和壞死肝細(xì)胞。
　　 2.肝切96小時(shí)后大鼠血清肝酶含量與假手術(shù)肝相比無明顯變化(P＞0.05)。CCl4損傷

6、后,假手術(shù)動(dòng)物和肝切動(dòng)物血清ALT和AST水平均上升:假手術(shù)肝損傷組上升幅度高于肝切損傷組(P＜0.001);京尼平處理的肝切組與未經(jīng)處理的肝切組相比無明顯變化(P＞0.05);京尼平處理過的肝切損傷組的肝酶水平也較京尼平處理的肝切組明顯升高(P＜0.001);京尼平處理的肝切損傷組的血清轉(zhuǎn)氨酶水平高于未經(jīng)處理的肝切損傷組指標(biāo)(P＜0.05)。
　　 3.肝切96小時(shí)后MDA和SOD含量與假手術(shù)肝相比無明顯變化(P＞0.05)。

7、假手術(shù)肝與再生肝在CCl4損傷后,組織中MDA和SOD變化明顯,其中MDA含量增加(P＜0.01),SOD含量降低(P＜0.05),與假手術(shù)損傷組相比,肝切損傷組的MDA含量明顯降低(P＜0.001),SOD含量明顯增高(P＜0.001);京尼平處理的肝切組與未經(jīng)處理的肝切組相比,MDA與SOD水平均無明顯變化(P＞0.05);京尼平處理過的肝切損傷組的與京尼平處理的肝切組相比,其MDA含量增加(P＜0.001),SOD含量降低(P＜0

8、.01);京尼平處理的肝切損傷組MDA含量高于未經(jīng)處理的肝切損傷組(P＜0.05),SOD含量低于未經(jīng)處理的肝切損傷組(P＜0.01)。
　　 4.免疫組化結(jié)果顯示:假手術(shù)組肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)UCP2蛋白。肝切組肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)陽性染色顆粒。假手術(shù)損傷組和肝切損傷組UCP2蛋白大量表達(dá),肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見大量的幾乎充滿胞漿的陽性染色顆粒。京尼平處理的肝切組肝細(xì)胞內(nèi)UCP2蛋白含量非常低。京尼平處理的肝切損傷組肝細(xì)胞內(nèi)也有較高U