乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎尿液蛋白質(zhì)組學的初步分析.pdf

1、目的：研究乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點，并與原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者及健康人尿液蛋白質(zhì)譜進行比較，篩選出乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎尿液中差異表達的蛋白質(zhì)，探討質(zhì)譜技術(shù)對該病的臨床診斷意義。
　　 方法：留取健康人(n=3)、原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎(n=3)及乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者(n=6)的空腹清潔中段晨尿標本，避免細菌生長和蛋白酶解于1小時內(nèi)放置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。取?2份標本溶解完全后

2、，用直徑0.22μm的微孔超濾膜過濾除去較大的雜質(zhì)，再用-20℃預冷丙酮進行蛋白沉淀，置于-20℃冰箱過夜后，經(jīng)4℃4000xg離心20分鐘，棄上清液，留取含尿蛋白的沉淀物，真空干燥濃縮。濃縮干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后應(yīng)用Bradford法測定蛋白濃度。據(jù)測定的標本蛋白濃度稱取每例樣品含1mg蛋白質(zhì)的混合固體，充分酶解后調(diào)整蛋白濃度為1μg/μ1，行HPLC-ESI-MS/MS分析，得到的肽序列結(jié)果用MASCOT軟件行數(shù)據(jù)庫檢索

3、，所用的庫為ipi．human，v3.05。將查得的蛋白序列號在Uniprot數(shù)據(jù)庫中進行檢索，查詢所表達的蛋白質(zhì)名稱、蛋白的作用及細胞學定位等相關(guān)信息。
　　 結(jié)果：健康人3份尿液標本中共鑒定出101種蛋白質(zhì)，通過手工驗證，所有3份標本共同表達了37種蛋白質(zhì)。原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者的3份尿液標本共鑒定出73種蛋白質(zhì)，所有3份標本中共同表達了15種蛋白質(zhì)。乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者的6份尿液標本共鑒定出206種蛋白質(zhì)

4、，所有6份標本共同表達了19種蛋白質(zhì)。從乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者共有的19種蛋白質(zhì)中手工剔除檢測出的健康人及原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者尿液中也存在的蛋白質(zhì)，還剩余9種蛋白質(zhì)，它們分別是血漿銅藍蛋白、α1-抗胰凝乳蛋白酶、Igλ鏈C區(qū)、Igγ2鏈C區(qū)、Igα1鏈C區(qū)、Igα2鏈C區(qū)、維生素D結(jié)合蛋白、前列腺素D2合酶、未命名蛋白(C9JAM6)。
　　 結(jié)論：本實驗利用HPLC-ESI-MS/MS技術(shù)研究了乙型肝炎病毒相