阿托伐他汀調(diào)節(jié)PI3K-Akt-eNOS途徑對UUO小鼠管周微血管密度的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：探討阿托伐他汀(atrovastatin, ATO)調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶-B/內(nèi)皮型一氧化氮合酶(phosphatidylinositol-3 kinase/protein kinase-B/endotheliAlnitricoxide synthase, PI3K/Akt/eNOS) 途徑對單側(cè)輸尿管梗阻(unilaterAlureterAlobstruction, UUO)腎間質(zhì)纖維化(renAlinterstit

2、ium fibrosis, RIF)小鼠管周微血管(peritubular capillary, PTC)密度的影響及機(jī)制。
　　 方法：96只SPF級雌性昆明小白鼠隨機(jī)分為3組，每組32只：①單側(cè)輸尿管結(jié)扎組(UUO組)：行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)；②假手術(shù)組(Sham組)：進(jìn)入腹腔后游離右側(cè)輸尿管但不結(jié)扎；③單側(cè)輸尿管結(jié)扎+阿托伐他汀干預(yù)組(ATO組)：結(jié)扎右側(cè)輸尿管后，予阿托伐他汀5mg.kg-1.d-1灌胃直至處死。分別于實(shí)驗(yàn)第

3、7、14、21、28天每組隨機(jī)抽取8只小鼠，頸椎脫臼處死，留取血液和腎臟標(biāo)本：①檢測血尿素氮、肌酐水平。②流式細(xì)胞檢測外周血單個核細(xì)胞中CD133+/VEGFR2+雙陽性細(xì)胞比例。③Masson染色后光鏡下觀察腎組織形態(tài)改變，并進(jìn)行腎間質(zhì)纖維化評分。④免疫組化檢測腎間質(zhì)Akt、p-Akt和eNO的表達(dá)。⑤免疫組化檢測腎間質(zhì)CD34+細(xì)胞數(shù)目以評估PTC 密度。
　　 結(jié)果：①血尿素氮、肌酐水平：整個實(shí)驗(yàn)過程中三組小鼠血尿素氮、肌

4、酐未見明顯變化，各組之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。②外周血單個核細(xì)胞中CD133+/VEGFR2+雙陽性細(xì)胞比例：造模前隨機(jī)抽取8只小鼠檢測外周血CD133+/VEGFR2+雙陽性細(xì)胞比例作為正常對照組。實(shí)驗(yàn)后三組小鼠外周血單個核細(xì)胞中CD133+/VEGFR2+雙陽性細(xì)胞比例均于第1周末升高達(dá)峰值，較正常對照組明顯升高(P<0.05)，第2周后下降；Sham組第2、3、4周較正常對照組無明顯變化(P>0.05)，UUO組

5、第2周末將至正常水平以下，第3、4周較正常對照組明顯降低(P<0.05)，ATO組第2、3、4周較正常對照組明顯升高(P<0.05)。③腎間質(zhì)纖維化評分：Sham組腎間質(zhì)纖維化評分在各時間點(diǎn)無明顯變化，UUO組和ATO組腎間質(zhì)纖維化評分均隨著造模時間延長逐漸加劇，整個實(shí)驗(yàn)過程中ATO組較同期UUO組明顯降低，但仍較同期Sham組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。④Akt和p-Akt的表達(dá)：Sham組腎間質(zhì)Akt、p-Akt的表達(dá)未

6、見明顯變化，UUO組第1周腎間質(zhì)Akt、p-Akt 較Sham 明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，第2、3、4周表達(dá)逐漸下降，第3、4周較Sham組顯著降低(P<0.05)；ATO組腎間質(zhì)Akt、p-Akt的表達(dá)在第1周末達(dá)高峰，以后隨造模時間延長逐漸降低，各時間點(diǎn)均高于同期Sham組和UUO組(P<0.05)。eNOS ⑤的表達(dá)：Sham組腎間質(zhì)eNOS的表達(dá)未見明顯變化，UUO組和ATO組腎間質(zhì)eNOS的表達(dá)均隨著造模時間

7、延長逐漸降低，第2、3、4周均明顯低于Sham組(P<0.05)，第2、3、4周各時間點(diǎn)ATO組較UUO組明顯升高(P<0.05)。⑥PTC密度計數(shù)：Sham組腎間質(zhì)PTC 密度未見明顯變化，UUO組和ATO組腎間質(zhì)PTC 密度均隨著造模時間延長逐漸降低，第2、3、4周均明顯低于Sham組(P<0.05)，第2、3、4周各時間點(diǎn)ATO組較UUO組明顯升高(P<0.05)。相關(guān)分析顯示UUO組和ATO組以下指標(biāo)之間存在直線相關(guān)關(guān)系：p-A

8、kt與EPCs之間呈直線正相關(guān)(r=0.902, P<0.01)；EPCs與PTC密度之間呈直線正相關(guān)(r=0.720, P<0.01)；p-Akt與eNOS之間呈直線正相關(guān)(r=0.569, P<0.01)；eNOS與PTC密度之間呈直線正相關(guān)(r=0.762, P<0.01)。
　　 結(jié)論：①阿托伐他汀可以增加UUO小鼠腎間質(zhì)PTC密度，從而延緩RIF。②阿托伐他汀增加UUO小鼠腎間質(zhì)PTC密度可能是通過激活PI3K/Akt