NLRP3炎癥小體表達(dá)水平與NSTEACS患者PCI術(shù)預(yù)后相關(guān)性的研究.pdf

1、急性冠脈綜合征(ACS)是一種炎癥性疾病。NSTEACS作為ACS的最常見臨床亞型，患者最多，其臨床表現(xiàn)、危險(xiǎn)性和預(yù)后不盡相同，是發(fā)達(dá)國家及我國人群致殘、致死的主要原因之一。循證醫(yī)學(xué)證實(shí)，作為治療冠心病的主要措施，經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)可挽救患者生命，提高生活質(zhì)量，但是術(shù)后再狹窄率高，因此，為臨床探尋新的治療靶點(diǎn)，尋找提示預(yù)后的相關(guān)因子，對(duì)于行PCI術(shù)治療的NSTEACS患者具有重要意義。
　　在動(dòng)脈粥樣硬化(Athero

2、sclerosis，AS)的發(fā)生發(fā)展中，炎癥反應(yīng)發(fā)揮了重要作用。IL-1β(interleukin-1β，IL-1β)不僅是一種重要的促炎因子，也是一種強(qiáng)有力的致AS細(xì)胞因子。近來研究表明，炎癥小體可調(diào)控IL-1β的成熟。當(dāng)前結(jié)構(gòu)和功能最為明確的為NLRP3炎癥小體。NLRP3被激活后，可與下游的銜接蛋白ASC結(jié)合，ASC轉(zhuǎn)而通過其CARD結(jié)構(gòu)域募集pro-caspase-1，炎癥小體形成后pro-caspase-1將會(huì)進(jìn)行自我激活，形

3、成具有活性的caspase-1，活化的caspase-1可剪切非活性的前體pro-IL-1β，使其轉(zhuǎn)化成具有活性的IL-1β。
　　血液循環(huán)中NLRP3炎癥小體主要來源于外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMCs)。研究表明，NLRP3炎癥小體在急性心肌梗死、心肌缺血再灌注等動(dòng)物模型中表達(dá)上調(diào)，在冠心病患者主動(dòng)脈中也存在過度表達(dá)。這些研究結(jié)果均提示，NLRP3炎癥小體很可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)的進(jìn)程。
　　SYNTAX評(píng)分是一種基

4、于冠脈造影結(jié)果并給予冠脈病變程度量化的工具，可以較全面得定量評(píng)估冠脈病變并能有效預(yù)測(cè)不同患者人群PCI術(shù)后的不良心血管事件。但目前，對(duì)于行PCI術(shù)的NSTEACS患者，其PBMCs中NLRP3炎癥小體的表達(dá)情況以及與SYNTAX評(píng)分及冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性尚未見報(bào)道。
　　因此，本研究將收集行PCI術(shù)的NSTEACS患者，檢測(cè)NLRP3炎癥小體的表達(dá)水平，探討其表達(dá)水平與冠脈病變嚴(yán)重程度及其預(yù)后的相關(guān)性。
　　目的：

5、>　　(1)探究行PCI術(shù)的NSTEACS患者PBMCs中NLRP3炎癥小體的表達(dá)水平;
　　(2)探究行PCI術(shù)的NSTEACS患者NLRP3炎癥小體與冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性;
　　(3)探究行PCI術(shù)的NSTEACS患者NLRP3炎癥小體在評(píng)估其預(yù)后中的價(jià)值。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象
　　收集自2014年11月至2015年5月于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院就診并成功行PCI術(shù)的NSTEACS患者70例，對(duì)照

6、組29例。NSTEACS的診斷依據(jù)參照歐洲心臟病學(xué)會(huì)(European Society of Cardiology, ESC)的診斷標(biāo)準(zhǔn)?；加幸韵录膊≌卟荒芗{入實(shí)驗(yàn):各種類型的心肌病、心臟瓣膜病、痛風(fēng)、矽肺、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、阿爾茨海默病、急性或慢性炎癥性疾病。采集入組對(duì)象的基本資料信息，記錄選擇性冠狀動(dòng)脈造影(coronary artery angiography, CAG)結(jié)果。山東大學(xué)齊魯醫(yī)院倫理委員會(huì)已審核通過本研究。
　　

7、2.PBMCs的收集、分離
　　收集實(shí)驗(yàn)對(duì)象外周血，離心后分離出PBMCs及血漿，-80℃冰箱貯存?zhèn)溆茫⒁饩幪?hào)。
　　3.實(shí)時(shí)定量PCR
　　提取的PBMCs中NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA表達(dá)水平應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)。
　　4.Western blot
　　提取PBMCs中的總蛋白，NLRP3、caspase-1及IL-1β的蛋白利用western blot進(jìn)行檢測(cè)。

8、　　5.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)
　　研究對(duì)象外周血血漿中IL-1β的含量利用ELISA進(jìn)行檢測(cè)。
　　6.隨訪
　　NSTEACS患者PCI術(shù)后，對(duì)患者進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪，記錄統(tǒng)計(jì)患者PCI術(shù)后6個(gè)月內(nèi)不良心血管事件（包括非致命性再次心肌梗死、再發(fā)心絞痛、靶血管血運(yùn)重建、再次入院復(fù)合終點(diǎn)）的發(fā)生率。
　　7.統(tǒng)計(jì)分析
　　SPSS21.0用于統(tǒng)計(jì)分析。分類變量以百分?jǐn)?shù)形式表示，連續(xù)變量以均數(shù)±標(biāo)

9、準(zhǔn)差或標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表示。t檢驗(yàn)用于兩組連續(xù)變量間統(tǒng)計(jì)分析。兩組分類變量的統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用卡方檢驗(yàn)。NLRP3的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性應(yīng)用偏相關(guān)分析。NSTEACS患者6個(gè)月內(nèi)發(fā)生不良心血管事件的影響因素應(yīng)用Cox回歸分析。2組NSTEACS患者6個(gè)月內(nèi)發(fā)生不良心血管事件的比較應(yīng)用Log-rank檢驗(yàn)。Kaplan-Meier法繪制2組NSTEACS患者6個(gè)月內(nèi)發(fā)生不良心血管事件的時(shí)間-效應(yīng)曲線。均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)

10、差異。
　　結(jié)果：
　　1.研究對(duì)象基本臨床資料
　　表1為Control組及NSTEACS組的臨床資料統(tǒng)計(jì)。在所研究的指標(biāo)中，僅高密度脂蛋白膽固醇水平(HDL-C; p=0.034)及阿司匹林和或氯匹格雷的藥物服用率(p＜0.001)在NSTEACS組及Control組中存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.NLRP3及其下游炎癥因子在NSTEACS患者中表達(dá)增加
　　NSTEACS組PBMCs中NLRP3、casp

11、ase-1及IL-1β的mRNA表達(dá)水平較control組明顯升高（P均＜0.001），見圖1。如圖2所示，與mRNA表達(dá)水平一致，NSTEACS組PBMCs中三者的蛋白表達(dá)水平較control組也明顯升高（P均＜0.05）。ELISA檢測(cè)外周血血漿中IL-1β的含量，NSTEACS組高于control組(P＜0.001)。
　　3.NSTEACS患者NLRP3與臨床參數(shù)的相關(guān)性
　　剔除了年齡、性別等影響因素后，NSTEA

12、CS組PBMCs中NLRP3的mRNA水平與caspase-1(r=0.410，p=0.001)及IL-1β(r=0.422，p＜0.001)相關(guān)，見表2。
　　4.NSTEACS患者NLRP3與SYNTAX評(píng)分的相關(guān)性
　　Person相關(guān)分析表明，NLRP3表達(dá)水平與SYNTAX評(píng)分正相關(guān)(r=0.532，p＜0.001)。
　　5.NSTEACS患者冠脈造影特征
　　依據(jù)CAG結(jié)果，NLRP3 mRNA表達(dá)

13、量高的患者冠脈三支血管病變、長病變及完全閉塞的發(fā)生率以及支架植入數(shù)目均高于NLRP3 mRNA表達(dá)量低的患者(p＜0.05)，見表4。
　　6.NLRP3 mRNA表達(dá)水平是NSTEACS患者PCI術(shù)后6個(gè)月內(nèi)不良心血管事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素
　　將NSTEACS患者的NLRP3、Caspase-1以及IL-1β的mRNA表達(dá)水平納入Cox多因素回歸分析模型，結(jié)果顯示NLRP3 mRNA水平(HR:1.665，95％置信區(qū)間:1

14、.208-2.296，p=0.002)是NSTEACS患者PCI術(shù)后6個(gè)月內(nèi)不良心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見表5。
　　7.NLRP3 mRNA表達(dá)水平與NSTEACS患者PCI術(shù)預(yù)后相關(guān)
　　在NSTEACS患者中，NLRP3 mRNA表達(dá)量低的患者PCI術(shù)后6個(gè)月內(nèi)發(fā)生不良心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)低于NLRP3 mRNA表達(dá)水平高的患者(p＜0.05)，見圖3。
　　結(jié)論：
　　(1)行PCI術(shù)的NSTEACS患者P