膽酸受體激動(dòng)劑對(duì)NLRP3炎癥小體激活的影響及機(jī)制研究.pdf

1、膽酸是一類具有親疏水兩性的分子，主要通過(guò)其相應(yīng)受體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。膽酸受體包括跨膜鳥(niǎo)苷結(jié)合蛋白偶聯(lián)受體5（transmembrane guanosine-binding protein coupled receptor-5，TGR5）和法尼醇Ⅹ受體(farnesoidⅩreceptor，F(xiàn)XR)等。炎癥小體是細(xì)胞內(nèi)一系列蛋白質(zhì)的復(fù)合體，在宿主抵御外源病原微生物以及炎癥發(fā)生過(guò)程中起到非常重要的作用。其中研究最為廣泛的NLRP3(NLRf

2、amily pyrin domain containing3)炎癥小體由NLRP3、ASC(absent in melanoma2)以及caspase-1組成，其激活過(guò)程受到NLRP3蛋白的泛素化和ASC蛋白的泛素化的調(diào)控。已有的毒理學(xué)研究認(rèn)為NLRP3炎癥小體的激活是外源化學(xué)物致毒機(jī)制之一，因此研究NLRP3炎癥小體的激活過(guò)程有助于我們更好了解外源化學(xué)物致毒機(jī)制。
　　本研究使用小鼠原代巨噬細(xì)胞以及HEK293T細(xì)胞作為研究載體

3、，通過(guò)運(yùn)用蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定、Phos-tag以及體外激酶實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)證明膽酸可以抑制NLRP3炎癥小體的激活，并通過(guò)激活TGR5信號(hào)通路引起NLRP3蛋白的泛素化，阻止ASC蛋白寡聚體的形成。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)直接激活TGR5下游PKA能夠通過(guò)磷酸化NLRP3蛋白第291位絲氨酸促進(jìn)NLRP3蛋白泛素化。
　　GW4064是膽酸另一受體FXR的特異性激動(dòng)劑。通過(guò)運(yùn)用化學(xué)交聯(lián)法和小鼠原代巨噬細(xì)胞泛素化檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn)GW4064能通過(guò)

4、降低ASC蛋白的泛素化和寡聚化抑制NLRP3炎癥小體激活，但令我們驚奇的是，GW4064對(duì)NLRP3炎癥小體激活的抑制作用不依賴FXR。此外通過(guò)鋁佐劑引起的腹腔炎以及細(xì)菌脂多糖引起的膿毒血癥模型，我們發(fā)現(xiàn)GW4064也能夠在小鼠體內(nèi)抑制NLRP3炎癥小體的激活。
　　綜上，本研究表明膽酸通過(guò)TGR5信號(hào)通路磷酸化NLRP3蛋白第291位絲氨酸并增強(qiáng)NLRP3蛋白泛素化水平，最終抑制NLRP3炎癥小體激活，GW4064通過(guò)減少ASC