三氧化二砷聯(lián)合免疫抑制劑治療再生障礙性貧血的初步研究.pdf

1、再生障礙性貧血(AplasticAnemia，AA)通常是指原發(fā)于骨髓造血功能衰竭的綜合征，是一種病因不明的少見的因造血干細(xì)胞障礙導(dǎo)致外周血細(xì)胞和骨髓細(xì)胞減少的疾病。AA患者骨髓最顯著的病理特征是骨髓脂肪化。目前以抗胸腺細(xì)胞免疫球蛋白(AntithymocyteGlobulin，ATG)或抗淋巴細(xì)胞免疫球蛋白(AntilymphocyteGlobulin，ALG)為基礎(chǔ)的免疫抑制療法及造血干細(xì)胞移植(HematopoieticStemC

2、ellTransplantation，HSCT)已大大改善了AA的愈后，但因高昂的治療費用、ATG/ALG治療后高復(fù)發(fā)率、高感染率、供體來源、年齡因素及HSCT并發(fā)癥等，使ATG/ALG治療及HSCT在臨床應(yīng)用受到了很大的限制。適當(dāng)濃度的三氧化二砷(arsenictrioxide，ATO)在體外可顯著抑制健康成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcellsMSC)的成脂分化潛能，提示ATO極有可能可通過調(diào)控、糾正MSC成脂

3、和成骨分化失衡而改變AA患者骨髓造血微環(huán)境異常。對AA患者骨髓造血微環(huán)境中骨髓MSC的成脂與成骨分化失衡的調(diào)節(jié)，無疑可為AA的治療提供一新的切入點。
　　 本研究擬在確認(rèn)AA患者骨髓MSC成脂和成骨分化異常的基礎(chǔ)上，利用流式細(xì)胞術(shù)、實時熒光定量PCR及造血干祖細(xì)胞體外克隆等研究手段，體內(nèi)外探討ATO調(diào)控AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的有效性。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合AA的主要發(fā)病機制，體內(nèi)進(jìn)一步探討ATO聯(lián)合免疫抑制療法治療AA的

4、安全性與有效性，為治療AA探索新方法。本研究分為基礎(chǔ)研究部分和臨床研究部分。
　　 第一部分，基礎(chǔ)研究部分
　　 三氧化二砷作用于再生障礙性貧血患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的初步研究
　　 [目的]探討ATO調(diào)控、糾正AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的有效性。
　　 [方法]分別從初治AA患者和健康供者骨髓中分離出骨髓MSC，在實驗組(AA患者BM-MSCs)加入ATO，對照組1(正常BM-MSCs)、對照組

5、2(AA患者BM-MSCs)分別加入等量培養(yǎng)基，分別誘導(dǎo)成脂和成骨，采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、油紅0染色、VonKossa染色及RQ-PCR等檢測手段，檢測ATO調(diào)控AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的特性。
　　 [結(jié)果]對照組2較對照組1形成脂滴時間早、數(shù)量多且體積更大，更易向脂肪細(xì)胞分化。對照組2較對照組1出現(xiàn)鈣鹽沉積時間晚、體積小，成骨分化能力明顯減弱。實驗組較對照組2脂滴數(shù)量少、體積小而鈣鹽沉積增多，成脂分化相關(guān)基因LPL

6、較對照組2表達(dá)明顯降低，而成骨分化相關(guān)基因OST較對照組2表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 [結(jié)論]ATO在體外可以糾正AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡。
　　 第二部分，臨床研究部分
　　 三氧化二砷聯(lián)合環(huán)孢素治療再生障礙性貧血的臨床觀察
　　 [目的]初步探討ATO聯(lián)合環(huán)孢素治療AN的療效與安全性。
　　 [方法]收集2007年4月至2012年5月期間在河南省腫瘤醫(yī)院血液科接受ATO

7、治療的AN患者。ATO:0.15mg/kg/d，避光連續(xù)靜脈輸注4小時以上，每天1次，連用5天，間隔2天，連用8周;如需要，可休息一周后，再重復(fù)上述用藥方式一次，即總療程不超過17周。環(huán)孢素(cyclosporinACsA):5mg/kg/d，定期監(jiān)測血藥濃度，適當(dāng)調(diào)整劑量，維持血漿藥物谷濃度于150～250ng/ml之間，連續(xù)服用至實驗結(jié)束后視具體療效再做具體調(diào)整。治療期間監(jiān)測血常規(guī)、肝腎功能、心肌酶譜及心電圖等相關(guān)輔助檢查，定期復(fù)查