化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞相關(guān)蛋白的靶向作用.pdf

1、目的：糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）又稱糖尿病(diabetes mellitus，DM)腎小球硬化癥，是 DM最常見、最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，隨著人們生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的變化，我國DN的發(fā)病率還在逐年上升，已成為導(dǎo)致終末期腎病的第二位原因，僅次于各種腎小球腎炎。盡管國內(nèi)外腎臟病學(xué)者不斷探索 DN的發(fā)病機(jī)制及治療方法，但目前為止，發(fā)病機(jī)制尚未明了，也未找到特效的治療方法。傳統(tǒng)中醫(yī)藥以其多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)

2、效應(yīng)的重要優(yōu)勢，在有效防治DN中凸現(xiàn)出很大潛力。近年來中醫(yī)對DN病機(jī)有了更深層次的認(rèn)識，認(rèn)為瘀血阻絡(luò)為其關(guān)鍵病機(jī)，貫穿于DN始終，并有臨床報道，100％的DN患者存在瘀血阻絡(luò)的證候特征，因此在眾多治療DN中藥復(fù)方中化瘀通絡(luò)藥的使用頻率最高，一度成為復(fù)方的基礎(chǔ)用藥，并且化瘀藥與通絡(luò)藥多聯(lián)合應(yīng)用，其療效也得到諸多醫(yī)家的廣泛認(rèn)可。但化瘀通絡(luò)中藥具有怎樣的作用機(jī)制，通過何種途徑發(fā)揮作用，化瘀藥、通絡(luò)藥的靶向特點(diǎn)以及二者之間是否具有協(xié)同關(guān)系等均有

3、待進(jìn)一步明確。本研究根據(jù)前期的動物實(shí)驗(yàn)及臨床觀察，選用化瘀通絡(luò)中藥全方川芎、丹參、地龍、水蛭、全蝎并按功效組分進(jìn)行拆方（化瘀藥：川芎、丹參；通絡(luò)藥：地龍、水蛭、全蝎兩類），采用高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射誘導(dǎo)DN大鼠為觀察對象，以瘀血阻絡(luò)和足細(xì)胞相關(guān)蛋白為主要切入點(diǎn)，通過動物實(shí)驗(yàn)及小鼠條件永生系足細(xì)胞的離體培養(yǎng)，從多水平、多靶點(diǎn)等不同層面探討和深化化瘀通絡(luò)中藥延緩DN作用機(jī)制和特點(diǎn)，為優(yōu)化中藥配伍，提高臨床療效提供

4、理論依據(jù)。
　　方法：
　　1化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對DN大鼠瘀血阻絡(luò)生物學(xué)指標(biāo)的干預(yù)作用
　　選用清潔級健康雄性SD大鼠65只，4～5周齡，體重80g～100g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取10只大鼠作為正常組(C組)，其余55只大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，4周后按35mg/kg腹腔注射1%STZ復(fù)制DM大鼠模型，72h后通過尾靜脈取血檢測大鼠 RBG，連續(xù)三次血糖≥16.7 mmol/L為 DM造模成功。成模大鼠按體重隨

5、機(jī)分為模型組（M組）12只、化瘀通絡(luò)中藥全方組（Q組）12只、化瘀中藥組（H組）12只、通絡(luò)中藥組（T組）12只。C組大鼠均腹腔注射相應(yīng)體積不含STZ的0.1 mol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液。DM大鼠造模成功1周后，根據(jù)動物體表面積比率換算等效計量法計算各組大鼠用藥量，Q組：丹參1.35g/(kg?d)，川芎1.08g/(kg?d)，地龍0.9g/(kg?d)，水蛭0.54g/(kg?d)，全蝎0.54g/(kg?d)；H組：丹參1.

6、35 g/(kg?d)，川芎1.08g/(kg?d)；T組：地龍0.9g/(kg?d)，水蛭0.54g/(kg?d)，全蝎0.54g/(kg?d)。各組藥物定容至1ml/100mg體重進(jìn)行灌胃，同時C組、M組大鼠給以相應(yīng)量的飲用水。每日喂藥1次，連續(xù)用藥16周后，腹腔注射10%水合氯醛（0.35ml/100g）麻醉，腹主動脈取血，檢測各組大鼠隨機(jī)血糖、24h尿蛋白定量、血脂、凝血四項、血小板參數(shù)、血小板代謝產(chǎn)物等。剖開腹腔，快速切取部分

7、腎皮質(zhì)保存于4%中性甲醛固定液中，待行后續(xù)免疫組織化學(xué)檢測；切取部分腎皮質(zhì)，存放入凍存管內(nèi)，迅速投放到液氮中，短暫冷卻后轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱保存，待行后續(xù)分子生物學(xué)指標(biāo)檢測。
　　2化瘀通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用
　　清潔級健康雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為正常組10只和造模大鼠40只，造模方法同第一部分，將36只成模大鼠隨機(jī)分為模型組（M組）12只，化瘀通絡(luò)中藥全方組（Q組）12只，厄貝沙坦組（I組）12只。D

8、M大鼠造模成功1周后，根據(jù)動物與人體表面積進(jìn)行換算計算各組藥物劑量，Q組給藥量同第一部分，I組給藥量：13.5mg/（kg?d），同時C組、M組大鼠給以相應(yīng)量的飲用水，灌胃方法和時間同第一部分。分別于造模前(0周)、造模第4、8、12、16周末，各組大鼠分別放入代謝籠，自由飲食，收集24h尿液并計算尿蛋白定量，同時記錄大鼠體重、進(jìn)食量、飲水量，于第16周末腹主動脈取血，檢測腎功能；稱量腎重，計算腎臟指數(shù)，留取部分腎皮質(zhì)，通過光鏡、透射電

9、鏡檢測各組大鼠腎臟病理表現(xiàn)。
　　3化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞裂孔膜相關(guān)蛋白podocin、CD2AP、ZO-1的干預(yù)作用
　　第一部分實(shí)驗(yàn)取材時，切取部分腎皮質(zhì)保存于4%中性甲醛固定液中，采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry， IHC)對足細(xì)胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP定位檢測；切取部分腎皮質(zhì)，存放入凍存管內(nèi)，迅速投放到液氮中，短暫冷卻后轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱保存，通過熒光實(shí)

10、時定量反應(yīng)(Real-Time PCR)檢測各組大鼠腎組織足細(xì)胞裂孔膜蛋白 podocin、CD2AP、ZO-1的基因表達(dá)情況。
　　4化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞骨架蛋白 a-actinin-4、Synaptopodin的影響
　　第一部分實(shí)驗(yàn)取材時，快速留取腎組織標(biāo)本，-80℃保存，分別采用蛋白印跡法(Western-blot)、Real-Time PCR檢測各組大鼠腎組織足細(xì)胞骨架蛋白a-actinin-

11、4、Synaptopodin的蛋白及基因表達(dá)情況。
　　5化瘀通絡(luò)中藥對高糖刺激下足細(xì)胞相關(guān)蛋白的干預(yù)作用
　　采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將許可條件下培養(yǎng)的條件性永生化小鼠足細(xì)胞分為正常糖組（CG組）、高糖組（HG組）和高糖加藥組(HG+Z)組，干預(yù)24h、48h、72h后，分別采用免疫細(xì)胞化學(xué)法（immunocytochemistry, ICC）、Western-blot、Real-Time PCR檢測足細(xì)胞相關(guān)蛋白podoc

12、in、CD2AP的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對DN大鼠瘀血阻絡(luò)生物學(xué)指標(biāo)的干預(yù)作用
　　1.1各組大鼠一般狀況比較
　　C組：大鼠精神狀態(tài)良好，反應(yīng)敏捷，體格健壯，飲食正常，體重穩(wěn)定增加，二便正常，無大鼠死亡。M組：毛色晦暗干枯，弓背凸出聳毛，肌肉瘦削，反應(yīng)呆板，少動抱團(tuán)，尾部靜脈、舌質(zhì)、爪心顏色紫暗，隨著時間的延長，癥狀愈加明顯。各中藥組：大鼠上述癥狀均有不同程度減輕。
　　1.2各組

13、大鼠RBG比較
　　16w末，與C組相比，M組及各中藥組RBG均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與 M組相比，各中藥組 RBG差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；中藥各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.3各組大鼠24h UTP比較
　　16w末，與C組相比，M組及各中藥組24h UTP均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與M組相比，各中藥組24h UTP均有明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意

14、義（P<0.01）；中藥各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.4各組大鼠血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的比較
　　16w末，與C組相比，M組及各中藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與 M組比較，各中藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；各中藥組大鼠血清HDL-C與M組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.0

15、5)。各中藥組組間血清TG比較，由低到高依次為Q組、H組、T組，且Q組與T組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Q組略低于H組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，H組稍低于 T組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；各中藥組間大鼠血清LDL-C比較，由低到高依次為Q組、H組、T組，且Q組與T組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），Q組與H組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，H組低于 T組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；

16、各中藥組間大鼠血清TC、HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.5各組大鼠血凝指標(biāo)（PT、INR、APTT、TT、FIB）的比較
　　16w末，與C組比較，M組及各中藥組大鼠血漿PT明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與M組比較，各中藥組大鼠血漿PT明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；中藥各組間比較，Q組血漿PT較其他兩組延長，與T組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與H

17、組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與C組比較，M組及各中藥組大鼠血漿INR明顯減小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與M組比較，僅Q組INR明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各中藥組間大鼠血漿INR差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與C組比較，M組及各中藥組大鼠血漿APTT明顯縮短（P<0.01）；與 M組比較，Q組、H組大鼠血漿 APTT明顯延長（P<0.01），T組沒有明顯變化（P>0.05）；中藥各組間比較，Q組

18、血漿APTT較其他兩組延長，與T組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與H組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與C組比較，M組及各中藥組大鼠血漿FIB明顯升高（P<0.05，P<0.01）；與M組比較，各中藥組均有不同程度降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；中藥各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。各組間大鼠血漿TT比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　1.6各組大鼠血小板參數(shù)（PLT、MPV、PCT%、PD

19、W）的比較
　　16w末，與C組比較，M組及各中藥組大鼠血清PLT、PDW水平均有明顯變化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。與M組比較，各中藥組大鼠血清PLT、MPV、PCT%均明顯改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05， P<0.01），與 M組比較，僅 Q組的 PDW明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。各中藥組組間比較各指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05)。
　　1.7各組大鼠TXB2、6-keto-P

20、GF1a、TXB2/6-keto-PGF1a的水平比較
　　16w末，與 C組相比， M組及各中藥組大鼠血清 TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a水平明顯升高，6-keto-PGF1a明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）。與M組比較，各中藥組大鼠血清TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a水平明顯降低，6-keto-PGF1a明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.05， P<0.01）。各中藥組

21、組間比較， Q組 TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a明顯低于 T組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其余各組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2化瘀通絡(luò)中藥對糖尿病腎病大鼠的腎保護(hù)作用
　　2.1各組大鼠不同時間點(diǎn)體重的比較
　　造模前(0周)，各組大鼠體重比較，差異無顯著性(P>0.05)；此后 C組大鼠體重隨時間穩(wěn)步增加。與C組相比，第4、8、12、16周末，M、Q、I組大鼠體重明顯

22、減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。M、Q、I三組兩兩比較，各時間點(diǎn)均無顯著性差異(P>0.05)。
　　2.2各組大鼠不同時間點(diǎn)進(jìn)食量的比較
　　造模前(0周)，各組大鼠進(jìn)食量比較，差異無顯著性(P>0.05)；此后， C組大鼠攝食量趨于相對恒定。與C組相比，第4、8、12、16周末，M、Q、I組大鼠攝食量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。M、Q、I三組兩兩比較，各時間點(diǎn)差異均無顯著性(P>0.05)。

23、>　　2.3各組大鼠不同時間點(diǎn)飲水量的比較
　　造模前(0周)，各組大鼠飲水量比較，差異無顯著性(P>0.05)；此后， C組大鼠飲水量趨于恒定。與C組相比，第4、8、12、16周末，M、Q、I組大鼠飲水量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。M、Q、I三組兩兩比較，各時間點(diǎn)差異均無顯著性(P>0.05)。
　　2.4各組大鼠不同時間點(diǎn)尿量的比較
　　造模前(0周)，各組大鼠尿量比較，差異無顯著性(P>0.05)

24、；此后，C組大鼠尿量趨于恒定。與C組相比，第4、8、12、16周末，M、Q、I組大鼠尿量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。M、Q、I三組兩兩比較，各時間點(diǎn)差異均無顯著性(P>0.05)。
　　2.5各組大鼠不同時間點(diǎn)24h UTP的檢測
　　造模前(0周)，各組24h UTP無明顯差異(P>0.05)；與C組比較，第4、8、12、16周末，M、Q、I組大鼠24h UTP均明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

25、與M相比，第4、8、12、16周末，Q、I組24h UTP均有明顯減少（P<0.05，P<0.01）。Q、I組間比較，僅16周末，Q組改善尤為明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ P<0.05），其余時間點(diǎn)比較差異無顯著性(P>0.05)。
　　2.6各組大鼠KI、Cys-c、Scr、BUN、UA的比較
　　16周末，與C組相比，M、Q、I組大鼠KI、Cys-c、Scr、BUN、UA水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.

26、01）。與M組比較，Q、I組Cys-c、BUN均有顯著改善（P<0.05，P<0.01），KI、Scr、UA無明顯變化(P>0.05)。Q、I組間比較，各指標(biāo)均無顯著性差異(P>0.05)。
　　2.7各組大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)的比較
　　光鏡：C組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰，毛細(xì)血管腔未見擴(kuò)張，腎小球無肥大或萎縮，基底膜未見增厚，系膜無增生。M組大鼠腎小球體積增大，基底膜彌漫增厚，系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)增寬，腎小囊腔變窄，呈裂隙狀，腎小

27、管上皮細(xì)胞肥大，腎間質(zhì)水腫，部分纖維化。與 M組相比，兩治療組病理改變均有一定程度減輕。
　　電鏡：C組大鼠可見腎小球基底膜結(jié)構(gòu)清晰，均勻無增厚，足突排列較整齊，系膜細(xì)胞未見增殖，系膜基質(zhì)未見增生。M組大鼠基底膜結(jié)構(gòu)欠清晰，均勻彌漫增厚，足突增寬或廣泛融合。與 M組相比，兩治療組均有不同程度改善，腎小球基底膜節(jié)段性增厚，足突部分融合。
　　3化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞裂孔膜蛋白 podocin、CD2AP、Z

28、O-1的干預(yù)作用
　　3.1各組大鼠腎皮質(zhì)podocin、CD2AP蛋白表達(dá)的定位分析（見Fig.1、Fig.2）
　　C組大鼠 podocin局限性分布于腎小球并呈棕黃色染色，主要沿基底膜呈線狀分布，腎小管和間質(zhì)未見明顯表達(dá)；M組大鼠podocin在腎小球的分布欠均勻，且表達(dá)明顯減弱；與 M組相比，各中藥組 podocin表達(dá)明顯增強(qiáng)，沿基底膜線狀分布有所恢復(fù)。
　　C組大鼠CD2AP主要分布在腎小球并呈棕黃色染色，

29、在腎小管和集合管也有少量表達(dá)；M組大鼠CD2AP在腎組織表達(dá)明顯減弱；與M組相比，各中藥組CD2AP表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　3.2各組大鼠腎組織podocin mRNA的表達(dá)
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其余各組大鼠腎組織中podocin mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.01）；與M組相比，各中藥組腎組織podocin mRNA的表達(dá)明顯增多（P<0.01）；各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次為T組、H組，且Q組與T、H兩組比

30、較均有明顯差異（P<0.05），T組與H組比較無明顯差異（P>0.05）。
　　3.3各組大鼠腎組織CD2AP mRNA的表達(dá)
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其余各組大鼠腎組織中CD2AP mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.01）；與M組相比，各中藥組腎組織CD2AP mRNA的表達(dá)明顯增多（P<0.01）；各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次為T組、H組，且Q、T兩組與H組比較均有明顯差異（P<0.01），T組與Q組比較差異無

31、統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.4各組大鼠腎組織ZO-1 mRNA的表達(dá)
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其余各組大鼠腎組織中ZO-1 mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.01）；與M組相比，各中藥組腎組織ZO-1 mRNA的表達(dá)明顯增多（P<0.01）；各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次為T組、H組，且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異（P<0.05，P<0.01），T組與H組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

32、　　4化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞骨架蛋白 a-actinin-4、Synaptopodin的影響
　　4.1各組大鼠腎皮質(zhì)a-actinin-4、Synaptopodin蛋白表達(dá)的定量分析
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其他各組大鼠腎組織α-actinin-4蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）。與M組相比，各中藥組大鼠腎組織α-actinin-4蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P<0.01）。中藥各組間比較，Q組改善

33、最為明顯，依次為T組、H組，且Q、T兩組與H組比較均有明顯差異（P<0.05， P<0.01），T組與Q組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其他各組大鼠腎組織Synaptopodin蛋白表達(dá)水平均明顯降低（ P<0.01）。與 M組相比，各中藥組大鼠腎組織Synaptopodin蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P<0.01）。各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次為T組、H組，且Q組與T、H兩組比較均有明

34、顯差異（P<0.05，P<0.01），T組與H組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　4.2各組大鼠腎皮質(zhì)a-actinin-4、Synaptopodin mRNA表達(dá)的相對定量分析
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其余各組大鼠腎組織中a-actinin-4 mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.01）；與M組相比，各中藥組腎組織a-actinin-4 mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）；各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次

35、為T組、H組，且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異（P<0.05，P<0.01）， T組與H組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)果顯示：與C組相比，其余各組大鼠腎組織中Synaptopodin mRNA表達(dá)明顯減少（P<0.01）；與M組相比，各中藥組腎組織Synaptopodin mRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）；各中藥組之間比較，Q組改善最為明顯，依次為T組、H組，且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異（P<0.

36、05）， T組與H組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　5化瘀通絡(luò)中藥對高糖刺激下足細(xì)胞相關(guān)蛋白的干預(yù)作用
　　5.1各組小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP免疫組化檢測結(jié)果
　　顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP蛋白的特異性免疫染色在正常組的足細(xì)胞細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核周圍呈細(xì)顆粒狀或線狀的強(qiáng)陽性表達(dá)；在高糖組的足細(xì)胞漿及細(xì)胞核周邊呈弱陽性表達(dá)；在最佳濃度的高糖加藥組的表達(dá)較高糖組有所增強(qiáng)

37、。
　　5.2各組小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP蛋白定量檢測結(jié)果
　　干預(yù)足細(xì)胞48h后，與CG組比較，HG組、（HG+Z）組podocin、CD2AP蛋白表達(dá)量明顯降低（P<0.05，P<0.01）；與HG組比較，（HG+Z）組podocin、CD2AP蛋白表達(dá)量明顯升高（P<0.05）；而干預(yù)24h、72h后，各組podocin、CD2AP蛋白的表達(dá)均無顯著差異（P>0.05）。
　　5.3各組小鼠足細(xì)胞po

38、docin、CD2AP mRNA檢測結(jié)果
　　與同時間點(diǎn)CG組比較，HG組、HG+Z組podocin、CD2AP mRNA表達(dá)均顯著升高（P<0.01）；與同時間點(diǎn) HG組比較，（HG+Z）組48h podocin、CD2AP mRNA表達(dá)量明顯升高（P<0.01），24h、72h與同時間點(diǎn)HG組無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1 DN大鼠存在瘀血阻絡(luò)證的改變，同時化瘀通絡(luò)中藥對其表現(xiàn)出一定改善作用，且化

39、瘀藥優(yōu)于通絡(luò)藥，具有協(xié)同作用。
　　2化瘀通絡(luò)中藥能夠顯著減少DN大鼠24小時尿蛋白，與對照藥物厄貝沙坦比較作用更穩(wěn)定、更持久。
　　3化瘀通絡(luò)中藥能夠減少DN大鼠血清尿素氮、胱抑素C，減輕腎組織病理形態(tài)學(xué)改變，與對照藥物厄貝沙坦療效相當(dāng)，具有腎保護(hù)作用。
　　4化瘀通絡(luò)中藥、化瘀中藥、通絡(luò)中藥均可上調(diào)足細(xì)胞裂孔膜蛋白（podocin、CD2AP、ZO-1）和骨架蛋白（α-actinin-4、Synaptopodin）