化瘀中藥與通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠的干預(yù)作用及對(duì)腎組織ACE2的影響.pdf

1、目的：鑒于化瘀通絡(luò)方治療糖尿病腎病臨床療效確切，且前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)其對(duì)糖尿病腎病 Sprague-Dauley大鼠腎組織 ACE2—Ang-(1-7)—Mas通路具有活化作用，本實(shí)驗(yàn)將化瘀通絡(luò)方拆解為化瘀中藥與通絡(luò)中藥對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行干預(yù)治療，通過(guò)通過(guò)觀察大鼠的一般情況、24小時(shí)尿蛋白定量、血生化指標(biāo)、血凝指標(biāo)、腎臟病理及腎組織ACE2的表達(dá)水平，對(duì)比化瘀中藥與通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。<

2、br>　　方法：選用清潔級(jí)健康雄性SD大鼠60只，體重60g-80g。普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，測(cè)定隨機(jī)血糖、24小時(shí)尿蛋白定量均為陰性者用于本實(shí)驗(yàn)，按體重隨機(jī)選取正常組（C組）10只，造模大鼠50只，正常組繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)，造模組給予高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，所有大鼠禁食不禁水12小時(shí)以上，造模組大鼠按35mg/kg一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）溶液，正常組大鼠給予相應(yīng)體積的枸櫞酸緩沖液腹腔注射。72

3、小時(shí)后測(cè)隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L者則為造模成功。造模成功大鼠共45只，隨機(jī)分為模型組（M組）12只、厄貝沙坦組（I組）11只、通絡(luò)組（T組）11只、化瘀組（H組）11只。造模成功后，各治療組給予相應(yīng)藥物灌胃，正常組及模型組予等體積純凈水灌胃，每日一次,連續(xù)給藥共16周。分別于給藥第2、4、8、16周末收集24小時(shí)尿液，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白含量，并于給藥16周末，尾靜脈取血測(cè)隨機(jī)血糖。大鼠禁食不禁水12小時(shí)，稱量體重，麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)

4、脈取血分離血清，用于檢測(cè)血液指標(biāo)，留取腎組織進(jìn)行光鏡、電鏡、免疫組化、反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerse chain reaction，RT-PCR）以及蛋白免疫印跡法（Western-blotting）檢測(cè)分析。
　　結(jié)果：⑴C組大鼠體重逐漸增加，精神狀態(tài)良好，眼睛有神，反應(yīng)敏捷，活動(dòng)自然，毛色光澤，肌肉豐滿，無(wú)畸形，飲水及飲食量正常，尿量正常，糞便呈麥粒狀。造模各組大鼠均于腹

5、腔注射STZ后出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀，體重相對(duì) C組大鼠減輕，精神萎靡，少動(dòng)抱團(tuán)，肌肉消瘦，毛色晦暗，甚至毛發(fā)脫落，卷曲拱背，骨骼突出，尾巴蒼白且尾部靜脈瘀紫明顯。上述癥狀M組大鼠最為嚴(yán)重。在給藥第16周時(shí)各治療組大鼠一般情況與M組比較均有不同程度的緩解。⑵不同時(shí)間點(diǎn)M組及各治療組的24小時(shí)尿蛋白定量均明顯高于C組；第16周末，與M組相比，各治療組24小時(shí)尿蛋白定量明顯降低（P＜0.05），各治療組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.

6、05）。⑶與C組相比，M組和各治療組隨機(jī)血糖均顯著升高（P＜0.05）；M組與各治療組及各治療組組間比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。⑷M組及各治療組總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平較 C組均明顯升高（P＜0.05）。與 M組相比較各治療組總膽固醇水平降低（P＜0.05），各治療組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與M組相比， T、H兩組甘油三酯及低密度脂蛋白水平均明顯降低（P＜0.05），I組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；

7、T、H兩組比較甘油三酯及低密度脂蛋白均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。⑸與C組相比較，M組及各治療組尿素氮、血肌酐均明顯升高（P＜0.05）；M組與各治療組以及各治療組組間比較尿素氮無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；與M組比較，各治療組血肌酐明顯降低（P＜0.05），各治療組組間比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。⑹與C組相比，M組和各治療組血漿纖維蛋白原明顯升高（P＜0.05）；與M組比較，I組無(wú)顯著差異（P＞0.05），T、H組明顯降低，T、H

8、組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。⑺C組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)正常清晰；M組大鼠腎小球肥大，腎小囊腔裂隙樣改變，甚至存在球囊粘連，基底膜明顯增厚，系膜基質(zhì)增多；與M組相比，各治療組病理改變均有所減輕。⑻C組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常清晰；M組大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜均質(zhì)樣增厚，部分足突融合，系膜基質(zhì)增多；與 M組相比，各治療組大鼠病理改變程度均有減輕。⑼與C組比較，M、I、T、H組第16周末腎皮質(zhì)ACE2 mRNA的表達(dá)降低（P＜0.05）；與 M組

9、比較，I、T、H組表達(dá)升高（P＜0.05）；各治療組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。⑽與C組相比，M、I、T、H組ACE2蛋白表達(dá)量減少（P＜0.05）；與M組相比，各治療組ACE2蛋白表達(dá)量增加（P＜0.05）；各治療組間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①結(jié)合大鼠隨機(jī)血糖、24小時(shí)尿蛋白定量、光鏡、電鏡等變化證明DN模型制備成功；根據(jù)血脂、血漿纖維蛋白原結(jié)果，證實(shí)DN大鼠存在高凝高黏狀態(tài)，符合中醫(yī)瘀血阻絡(luò)證

10、。②化瘀中藥、通絡(luò)中藥及厄貝沙坦可以改善DN大鼠一般情況，減緩蛋白尿的增加，維持腎功能，減輕DN病理?yè)p害，對(duì)DN大鼠具有腎臟保護(hù)作用。③根據(jù)血脂及血漿纖維蛋白原結(jié)果比較，化瘀中藥、通絡(luò)中藥能夠調(diào)節(jié)DN大鼠脂質(zhì)代謝，改善其高凝狀態(tài)，此方面作用優(yōu)于厄貝沙坦。④DN大鼠腎皮質(zhì)ACE2表達(dá)量降低，化瘀中藥、通絡(luò)中藥可上調(diào)ACE2表達(dá)量，提示化瘀中藥及通絡(luò)中藥延緩 DN進(jìn)展的靶點(diǎn)之一為ACE2，其作用機(jī)制可能與阻斷RAS有關(guān)。⑤化瘀中藥與通絡(luò)中藥