不同生長(zhǎng)階段尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚ghr1和igf1的表達(dá)分析.pdf

1、動(dòng)物生長(zhǎng)受到生長(zhǎng)軸的調(diào)控，生長(zhǎng)激素受體(GHR)和胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)是生長(zhǎng)軸中的重要組成成分，其基因表達(dá)水平與生長(zhǎng)密切相關(guān)，是研究生長(zhǎng)和生產(chǎn)性狀的候選基因，羅非魚（Oreochromis spp）是重要的世界性養(yǎng)殖魚類。本試驗(yàn)開展為期200天的羅非魚生長(zhǎng)對(duì)比試驗(yàn)，并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR，Q-PCR)技術(shù)對(duì)尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)和奧利亞羅

2、非魚（Oreochromis aureus）生長(zhǎng)過程中肝臟和肌肉ghr1和igf1的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，為進(jìn)一步闡述羅非魚生長(zhǎng)軸基因表達(dá)機(jī)制、利用分子手段對(duì)羅非魚進(jìn)行選育等工作提供理論依據(jù)。
　　以β-actin為內(nèi)參基因，建立了以SYBR Green染料為熒光指示劑的羅非魚ghr1和igf1的Q-PCR實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了含有g(shù)hr1，igf1和-actin特異性片段的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，5倍梯度稀釋后以3次平行重復(fù)進(jìn)行Q-PC

3、R擴(kuò)增，根據(jù)所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值計(jì)算三個(gè)基因的拷貝數(shù)，以-actin為看家基因校對(duì)，最終確定ghr1和igf1的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明:ghr1，igf1和β-actin標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999，0.993，0.998，線性和擴(kuò)增效率良好;擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線平滑，為單一峰，沒有非特異性產(chǎn)物和引物二聚體生成;對(duì)尼羅羅非魚肝臟和肌肉組織進(jìn)行初步檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，結(jié)果重復(fù)性好，數(shù)據(jù)處理簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，能夠用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。
　　利用構(gòu)建

4、好的Q-PCR實(shí)驗(yàn)平臺(tái)跟蹤尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚在不同生長(zhǎng)階段（0、20、40、60、80、125、145、165、185、205天）肝臟和肌肉ghr1，igf1表達(dá)的發(fā)育性變化。結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)魚的體重增長(zhǎng)可以分為快速生長(zhǎng)期和平穩(wěn)期，在0～40天和145～165天時(shí)體重增長(zhǎng)較快，40～145天時(shí)較緩。兩種羅非魚肝臟ghr1和igf1表達(dá)水平0～40天和145～165天時(shí)高于40～145天，表達(dá)情況與體重增長(zhǎng)趨勢(shì)基本吻合，暗示尼羅羅非魚

5、和奧利亞羅非魚肝臟中g(shù)hr1和igf1的表達(dá)水平的差異是影響生長(zhǎng)速度的重要原因之一。肌肉ghr1的表達(dá)規(guī)律與肝臟中類似，但滯后于肝臟ghr1的表達(dá)約1個(gè)采樣周期，提示ghr1表達(dá)有組織特異性。相比肝臟，兩種羅非魚肌肉中igf1 mRNA含量要低到2個(gè)數(shù)量級(jí)，且表達(dá)模式與肝臟ghr1和igf1、肌肉ghr1不同，提示肌肉igf1表達(dá)有其自身規(guī)律。尼羅羅非魚肌肉igf1總體呈上升趨勢(shì)，奧利亞羅非魚沒有明顯趨勢(shì)，二者表達(dá)模式不相同，兩種羅非魚