奧利亞羅非魚雌激素β受體基因初步研究.pdf

1、雌激素受體(estrogen receptor,ER)是屬于類固醇激素核受體超家族成員，可介導雌激素實現(xiàn)其功能，是一種配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子。它與雌激素特異性地結(jié)合，通過雌激素應答元件調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，進一步影響雌性動物的第二性征、繁殖周期、生殖力、妊娠維持，從而影響胚胎發(fā)育和系統(tǒng)分化。然而越來越多的實驗結(jié)果表明，雌激素受體除了對雌性動物有影響外，對雄性動物的生殖生理也具有調(diào)控作用。本研究先后在雄性奧利亞羅非魚中克隆了兩種雌激素β受體，并檢測

2、了它們在奧利亞羅非魚中的組織分布模式，結(jié)合外源雌激素誘導和抑制內(nèi)源雌激素生成方法來檢測雌激素受體的差異表達等研究內(nèi)容，初步探討雌激素受體在硬骨魚類性別分化和性腺發(fā)育中的作用。主要研究結(jié)果如下： 1、本文通過RACE和RT-PCR方法在雄性奧利亞羅非魚中克隆得到了雌激素β受體的兩種亞型(OaERβ1，OaERβ2)的cDNA全序列，分別為4262bp和2506bp，且最長開放讀碼框分別編輯557和667個氨基酸。序列同源性及系統(tǒng)進

3、化樹分析表明這兩個基因均屬于雌激素受體家族，且分類、命名與其他哺乳動物和魚類一致。預測分析序列結(jié)構(gòu)，OaERβ1和OaERβ2的～級結(jié)構(gòu)均與其他核受體超家族相同，從N端到C端依次分為MB、C、D、E和F六個功能結(jié)構(gòu)域。其中C區(qū)和E區(qū)高度保守，分別為DNA結(jié)合區(qū)和配體結(jié)合區(qū)，且C區(qū)具有每個雌激素受體C區(qū)所特有的兩個鋅指結(jié)構(gòu)。 2、采用熒光定量RT-PCR方法，檢測了OaERβ1、OaERβ2在奧利亞羅非魚各組織的表達，結(jié)果表明：它

4、們存在明顯的組織特異性。OaERβ1在檢測的各組織中均有表達，其中性腺、肝臟、腎臟、腸中表達量較高，卵巢的表達量最高，而在鰓和脾的表達量最低。OaERβ2基因在垂體、肝、腎、精巢中高表達，其中以精巢的表達量最高，而在胃未檢測到ERβ2表達。 3、實時熒光定量PCR分析雄性奧利亞羅非魚在雌二醇(E2)誘導和芳香化酶抑制劑(Letrozole)處理后下丘腦.垂體.性腺軸各ERs的表達情況得知：E2可直接誘導下丘腦-垂體-性腺軸各部位

5、ER的表達，而垂體對雌激素的敏感性最低；并且雌激素作用在下丘腦主要是通過ERα介導的，而在精巢主要是通過ERβ2介導發(fā)揮作用。使用芳香化酶抑制劑Letrozole抑制內(nèi)源雌激素分泌后，下丘腦和垂體大部分ERs的表達量均明顯下降，只有下丘腦ERα表達量有所上升，可能是因為反饋作用的原因，同時也證明了ERα是下丘腦的主要表達模式。精巢ERα和ERβ1表達量稍微有所下降，但差異不顯著；ERβ2表達量無明顯變化，這表明雄性動物體內(nèi)的內(nèi)源性雌激素