阿托伐他汀對晚期糖基化終末產(chǎn)物誘導(dǎo)人內(nèi)皮細胞表達MCP-1mRNA的影響及其機制研究.pdf

1、目的：觀察阿托伐他汀對晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）表達單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）mRNA的影響，并探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR-γ）和核因子-κB（NF-κB）在阿托伐他汀抗炎效應(yīng)中的作用。
　　 方法:
　　 1膠原酶消化法獲取人臍靜脈內(nèi)皮細胞，取第3至5代細胞用于實驗。
　　 2 倒置相差顯微鏡形態(tài)觀察法及免疫細胞化學(xué)染色法鑒定人臍靜脈內(nèi)皮

2、細胞。
　　 3 實驗分組：①空白對照組；②牛血清白蛋白（BSA）組：用于與AGEs（AGE-BSA）組對照；③AGEs組：不同作用濃度的AGEs（10-4-10-1mg/ml）與細胞共同孵育24小時；④阿托伐他汀組：不同作用濃度的阿托伐他?。?.1、1、10μmol/L）分別與細胞孵育1小時后，加入AGEs（10-1mg/ml(根據(jù)③實驗結(jié)果選取最佳濃度)與細胞共孵育24小時；⑤15d-PGJ2（PPAR-γ激動劑）組：15d

3、-PGJ2（10μmol/L）與細胞孵育1小時后，加入AGEs（10-1mg/ml）與細胞共孵育24小時；⑥GW9662（PPAR-γ 抑制劑）組：GW9662（5000nmol/L）與細胞孵育1小時后，加入AGEs（10-1mg/ml）和阿托伐他?。?μmol/L）（根據(jù)④實驗結(jié)果選取最佳濃度）與細胞共孵育24小時。
　　 4 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）法檢測細胞MCP-1和PPAR-γ mRNA表達水平。

4、　　 5蛋白免疫印記法（Western-blot）測細胞核內(nèi)NF-κB p65水平。
　　 結(jié)果:
　　 1倒置相差顯微鏡下可見培養(yǎng)的細胞呈卵圓形或多角形，典型的鋪路石樣排列。經(jīng)CD31、CD34 染色，細胞胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒沉著（CD31、CD34陽性）。
　　 2 AGEs（10-4-10-1mg/ml）呈濃度依賴性促進人內(nèi)皮細胞MCP-1mRNA表達，分別是空白對照組的1.53倍、2.12倍、2.56倍、

5、4.71倍；AGEs濃度為10-4mg/ml時，細胞MCP-1mRNA表達水平即明顯增高（0.26±0.02vs0.17±0.04，P＜0.01）。
　　 3與AGEs組比較，阿托伐他汀（0.1、1、10μmol/L）呈濃度依賴性抑制細胞MCP-1mRNA表達；阿托伐他汀濃度為1μmol/L時，細胞MCP-1mRNA表達水平顯著降低（0.63±0.11vs1.03±0.07，P＜0.01）。
　　 4與空白對照組相比，A

6、GEs組人內(nèi)皮細胞PPAR-γ mRNA表達水平明顯降低（0.22±0.08vs0.69±0.09，P＜0.01），細胞核內(nèi)NF-κB p65水平顯著升高（0.78±0.06vs0.31±0.01，P＜0.01）；與AGEs組比，阿托伐他?。?μmol/L）組細胞PPAR-γ mRNA表達水平明顯升高（0.59±0.02vs0.22±0.08，P＜0.01），細胞核內(nèi)NF-κB p65水平顯著降低（0.40±0.03vs0.78±0.0

7、6，P＜0.01）。
　　 5與AGEs組相比，15d-PGJ2組細胞核內(nèi)NF-κB p65水平顯著降低(0.21±0.01vs0.78±0.06，P＜0.01）、MCP-1mRNA表達水平明顯降低（0.17±0.02vs0.93±0.12，P＜0.01）；與阿托伐他汀組比，GW9662組細胞核內(nèi)NF-κB p65水平明顯升高（0.53±0.02vs0.40±0.03，P＜0.01）、MCP-1mRNA表達水平顯著升高（0.62

8、±0.05vs0.30±0.07，P＜0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 1膠原酶消化法可獲得高純度的人臍靜脈內(nèi)皮細胞，為體外研究血管內(nèi)皮細胞的病理生理學(xué)特性提供了理想實驗?zāi)Ｐ停?br>　　 2 AGEs可下調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細胞PPAR-γ mRNA表達水平，增強細胞NF-κB活化，促進細胞MCP-1mRNA表達；
　　 3 阿托伐他汀可減弱AGEs對人臍靜脈內(nèi)皮細胞PPAR-γ mRNA表達的下調(diào)作用，抑制細胞N