嗜酸乳桿菌誘導HT-29細胞凋亡效應和機制研究.pdf

1、嗜酸乳桿菌是一種重要的益生菌，具有抗腫瘤的益生作用。但是嗜酸乳桿菌誘導結(jié)腸癌凋亡的具體機制還知之甚少，不具有系統(tǒng)性。本文擬從離體培養(yǎng)的結(jié)腸癌HT-29細胞和裸鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型(HT-29細胞造模)兩方面探究嗜酸乳桿菌CICC6074誘導結(jié)腸癌凋亡的具體機制。
　　本課題主要的研究方法和結(jié)果如下:
　　第2章:通過粘附實驗優(yōu)化嗜酸乳桿菌CICC6074粘附HT-29細胞最佳粘附條件為感染比100∶1，48h，環(huán)境pH為6

2、。采用CCK-8方法檢測嗜酸乳桿菌CICC6074能抑制HT-29細胞增殖。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細胞48h，抑制效果顯著(P＜0.05)，感染比100∶1的抑制率最大為57.25％。但對正常的結(jié)腸細胞沒有不良影響，不存在潛在的安全性問題。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，嗜酸乳桿菌CICC6074能誘導HT-29細胞染色質(zhì)濃縮、聚集，斷裂，還產(chǎn)生很多空泡等細胞凋亡的形態(tài)學改變。
　　第3章:采用流式細胞術(shù)檢測Rodamine123熒光強

3、度來反應HT-29的線粒體膜電位(ΔΨm)的變化。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細胞24h或48h，呈濃度依賴型誘導HT-29細胞ΔΨm下降。采用Western blot檢測HT-29細胞細胞色素C(Cyt-c)、Bax、Bcl-2、Caspase9和Caspase3蛋白表達量變化。嗜酸乳桿菌CICC6074作用細胞24h或48h，呈濃度依賴型促進線粒體Cyt-C釋放到胞漿，上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Caspase9、Caspase3蛋白表

4、達量，下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達量。嗜酸乳桿菌CICC6074可能通過線粒體途徑介導HT-29細胞凋亡。
　　第4章:通過建立結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤模型，研究嗜酸乳桿菌CICC6074誘導HT-29細胞凋亡的效果和途徑。高劑量的嗜酸乳桿菌CICC6074連續(xù)灌胃28天有誘導結(jié)腸癌凋亡的效應，并可能通過線粒體途徑介導結(jié)腸癌HT-29細胞的凋亡。
　　總之，本課題通過體內(nèi)、體外實驗表明嗜酸乳桿菌CICC6074呈濃度依賴型誘