嗜酸乳桿菌活菌制劑開發(fā)研究.pdf

1、通過對(duì)嗜酸乳桿菌增菌培養(yǎng)的各種研究文獻(xiàn)、報(bào)告等的分析,以及國內(nèi)外嗜酸乳桿菌益生制品的審視,認(rèn)識(shí)到嗜酸乳桿菌益生菌制品活菌數(shù)的研究一直都是一個(gè)難題,需要迫切的解決,對(duì)人類健康益生保健有著重大的影響。綜合國內(nèi)外嗜酸乳桿菌制品的研究、生產(chǎn)現(xiàn)狀,本研究在嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)工藝以及冷凍干燥工藝等多方面著手,以求提高嗜酸乳桿菌益生制品活菌數(shù),滿足國內(nèi)外生產(chǎn)以及人類生活保健的需要。
　　 本研究包括嗜酸乳桿菌基本生理活性測定、培養(yǎng)基配

2、方的研究、發(fā)酵罐發(fā)酵條件的摸索、離心收集活菌條件的研究、冷凍干燥保護(hù)配方工藝的研究等五部分的研究。
　　 第一部分通過模擬人體胃腸道環(huán)境,對(duì)嗜酸乳桿菌耐酸耐膽鹽、抑制有害菌、抵抗抗生素等各種生理生化能力活性指標(biāo),進(jìn)行了深入的研究。結(jié)果表明,嗜酸乳桿菌菌株具有很強(qiáng)的耐酸耐膽鹽能力,很強(qiáng)的抑制有害菌的能力,很強(qiáng)的抵抗抗生素的能力,能夠以較高的活性順利通過胃腸環(huán)境定殖于腸道發(fā)揮益生作用。
　　 第二部分在常規(guī)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,優(yōu)

3、化培養(yǎng)基碳源、氮源、益生因子等各種營養(yǎng)因素的添加,研究得到最佳培養(yǎng)基配方:葡萄糖2％,低聚異麥芽糖0.5％,乳糖0.1％,蛋白胨0.6％,胰蛋白胨0.45％,大豆蛋白胨0.45％,L-半胱氨酸鹽酸0.15％,牛肉膏1.0％,酵母提取物0.5％,吐溫-800.1％,硫酸錳0.25g,乙酸鈉5.0g,檸檬酸氫二氨2.0g,硫酸鎂0.58g,K2HPO4·3H2O2.0g,添加蒸餾水后總量為1000mL,121℃高壓蒸汽滅菌15min。培養(yǎng)嗜

4、酸乳桿菌可達(dá)菌數(shù)2.90×109cfu/mL,是MRS培養(yǎng)時(shí)的2倍之多,使嗜酸乳桿菌的增殖多了一倍。
　　 第三部分模擬工業(yè)發(fā)酵,在實(shí)驗(yàn)室瑞士比歐3.7L發(fā)酵罐中,摸索出最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件,恒溫37℃、恒pH5.85、恒定轉(zhuǎn)速100r/min,調(diào)堿中和劑為20％NH3·H2O,以2％接種量接入活化嗜酸乳桿菌KLDS1.8701進(jìn)行培養(yǎng),從8h～10h,以2.5g/L*h流加速度補(bǔ)充葡萄糖,10h～12h,以1g/L*h的速度補(bǔ)料,

5、12h收獲菌體。最終,菌數(shù)從MRS培養(yǎng)時(shí)的1.21×109cfu/mL,提高到7.01×109cfu/mL,提高約6～7倍。
　　 第四部分研究摸索離心工藝,得到最佳的離心方案,在4℃冷凍離心機(jī)中,設(shè)置離心力6000g,離心20min收集菌體,嗜酸乳桿菌離心收得率為82.71％,離心存活率為82.73％。
　　 第五部分對(duì)嗜酸乳桿菌冷凍干燥保護(hù)深入研究,得到最佳冷凍干燥保護(hù)劑組合:4％PVPK-30、20％脫脂乳、6％海