海馬P2X7受體介導(dǎo)gp120所致大鼠認(rèn)知功能障礙及柚皮苷的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）相關(guān)癡呆（HIV associated dementia，HAD）也稱艾滋病-癡呆復(fù)合征（AIDS-Dementia complex， ADC)學(xué)習(xí)記憶障礙是其主要的臨床表現(xiàn)之一。研究表明，ADC和神經(jīng)炎癥的發(fā)生與巨噬細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的活化有關(guān)。三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate, ATP）為調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞功能

2、的信號(hào)分子，受損神經(jīng)細(xì)胞釋放的 ATP能刺激周圍膠質(zhì)細(xì)胞釋放ATP及其它化學(xué)趨化物，而P2X7受體興奮能啟動(dòng)ATP誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞趨化。P2X7受體參與小膠質(zhì)細(xì)胞功能活動(dòng)的調(diào)節(jié)以及參與炎癥和免疫反應(yīng)，并與神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)，提示P2X7受體可能成為HAD防治的新靶點(diǎn)。柚皮苷（Naringin）是一類天然黃酮類（Flavonoids）物質(zhì)，具有抗炎、抗氧化應(yīng)激等作用。目前，對(duì) P2X7受體是否涉及 ADC尚不清楚，國(guó)內(nèi)外尚無柚皮苷通過

3、抑制P2X7受體產(chǎn)生防治ADC作用的研究報(bào)道。
　　目的：
　　通過建立HAD大鼠模型，觀察柚皮苷對(duì)HIV-1包膜糖蛋白gp120（gp120）所致大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬P2X7受體和P65蛋白的表達(dá)變化，研究柚皮苷改善P2X7受體介導(dǎo)gp120所致大鼠認(rèn)知障礙的作用及其可能機(jī)制。
　　方法：
　　健康Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重125-175 g，雄雌各半，隨機(jī)分為對(duì)照組（Ctrl）、假手術(shù)組

4、（Sham）、gp12050 ng/d組、gp12070 ng/d組、gp120100 ng/d組、柚皮苷10 mg治療組（gp12050 ng/d+Naringin10 mg/kg·d）、柚皮苷30 mg治療組（gp12050 ng/d+Naringin30 mg/kg·d）、柚皮苷90 mg治療組（gp12050 ng/d+Naringin90 mg/kg·d）和P2X7受體拮抗劑BBG組（gp12050 ng/d+BBG50 mg

5、/kg），每組6只。側(cè)腦室灌注gp120制備擬艾滋癡呆癥動(dòng)物模型，通過六臂水迷宮觀察gp120所致認(rèn)知障礙大鼠的行為學(xué)變化及柚皮苷的作用；Westren Blot、免疫組化、RT-PCR和qPCR等分子生物學(xué)方法檢測(cè)大鼠海馬P2X7受體蛋白/mRNA及P65蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，不同濃度gp120組大鼠逃避潛伏期和尋找目標(biāo)錯(cuò)誤次數(shù)具有時(shí)間效應(yīng)性（P<0.01），隨著水迷宮實(shí)驗(yàn)天數(shù)的增加，

6、各組大鼠的逃避潛伏期逐步縮短以及尋找目標(biāo)平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)逐漸減少；同時(shí)時(shí)間與gp120因素之間存在交互效應(yīng)（P<0.01）；單因素方差分析顯示，各組大鼠逃避潛伏期和出現(xiàn)錯(cuò)誤次數(shù)均存在組間差別，不同濃度 gp120組大鼠逃避潛伏期和尋找目標(biāo)象限的錯(cuò)誤次數(shù)與對(duì)照組比均顯著增多（P<0.01），說明側(cè)腦室灌注 gp120能引起大鼠認(rèn)知障礙，擬艾滋癡呆癥動(dòng)物模型造模成功。
　　2、Western Blot、免疫組化和PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組

7、比較，不同劑量gp120組大鼠海馬P2X7受體蛋白和mRNA的表達(dá)均有所上升（P<0.01），表明P2X7受體參與gp120誘導(dǎo)大鼠認(rèn)知障礙。
　　3、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各劑量柚皮苷治療組大鼠的逃避潛伏期和尋找目標(biāo)平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)與 gp120模型組相比均有所縮短(P<0.01)，說明柚皮苷對(duì)gp120所致大鼠認(rèn)知障礙有改善作用；柚皮苷治療組大鼠的逃避潛伏期和尋找目標(biāo)錯(cuò)誤次數(shù)與 gp120+BBG組比較無差異(P>0.05)，同時(shí)

8、各劑量柚皮苷治療組P2X7受體蛋白和 mRNA的表達(dá)與模型組相比均有所下降(P<0.01)，而柚皮苷治療組大鼠海馬P2X7受體蛋白/mRNA的表達(dá)與P2X7受體拮抗劑BBG組比較無差異(P>0.05)，說明柚皮苷可抑制P2X7受體介導(dǎo)的gp120所導(dǎo)致大鼠認(rèn)知障礙。
　　4、Western Blot結(jié)果表明，gp120組大鼠海馬P65蛋白的表達(dá)比對(duì)照組高（P<0.05），且柚皮苷治療組與 gp120+BBG相比無明顯差異(P>0.