無遷徙生長碳青霉烯耐藥奇異變形桿菌生物學(xué)特性、耐藥機(jī)制及分子分型研究.pdf

1、目的:探討無遷徙生長現(xiàn)象碳青酶稀耐藥奇異變形桿菌生物學(xué)特性、耐藥機(jī)制及分子分型特點(diǎn)，為院內(nèi)感染防控提供指導(dǎo)。此外，通過比較遷徙生長奇異變形桿菌與無遷徙生長奇異變形桿菌耐藥譜差異，為臨床針對(duì)該類細(xì)菌抗感染治療提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:回顧分析2013年1月至2014年12月武警杭州醫(yī)院臨床分離的奇異變形桿菌耐藥率;收集其中碳青霉烯類耐藥無遷徙奇異變形桿菌，菌株經(jīng)過多次傳代并觀察有無遷徙生長現(xiàn)象，通過半固體培養(yǎng)及鞭毛染色實(shí)驗(yàn)觀察菌株動(dòng)

2、力及鞭毛;利用脈沖凝膠電泳PFGE(Pulsed-field gel electrophoresis)分析菌株之間同源性;采用瓊脂稀釋法及E-test法進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)用ESBLs雙紙片實(shí)驗(yàn)和改良Hodge實(shí)驗(yàn)進(jìn)行表型確證，表型實(shí)驗(yàn)陽性菌株采用PCR方法和測序分析明確耐藥基因型。運(yùn)用S1-PFGE聯(lián)合Southern印跡雜交及質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化試驗(yàn)對(duì)碳青霉烯耐藥基因進(jìn)行定位，并分析耐藥基因周圍環(huán)境。最后對(duì)電轉(zhuǎn)子進(jìn)行目標(biāo)基因擴(kuò)增和藥敏驗(yàn)

3、證。
　　結(jié)果:無遷徙生長奇異變形桿菌生物學(xué)特性:通過比較菌體鞭毛染色發(fā)現(xiàn)，鏡下無遷徙菌株菌體小且規(guī)則并明顯缺失鞭毛結(jié)構(gòu);在半固體穿刺培養(yǎng)中只能沿穿刺線生長，不能沿線外蔓延擴(kuò)散，推測可能由于無遷徙菌株，鞭毛結(jié)構(gòu)缺失而失去遷徙生長的能力。兩種奇異變形桿菌生化特性相同。在不同培養(yǎng)基中生長情況提示，在含有膽鹽的麥康凱、SS平板上，兩種奇異變形桿菌均不能形成遷徙生長的菌落，群集運(yùn)動(dòng)消失。
　　本次研究共統(tǒng)計(jì)奇異變形桿菌339株，其中

4、無遷徙細(xì)菌42株;遷徙菌對(duì)亞胺培南與美羅培南耐藥率分別為6.3％與3.2％，無遷徙菌耐藥率分別為57.2％與52.4％，兩種形態(tài)菌株對(duì)碳青霉烯耐藥率具有顯著差異;42株無遷徒奇異變形桿菌中，碳青霉烯類耐藥的奇異變形桿菌為24株，占57％。對(duì)該24株碳青霉烯類耐藥無遷徙生長奇異變形桿菌進(jìn)行PFGE同源性分析，結(jié)果提示分為3個(gè)克隆型，以克隆A型（22/24株）流行為主，所有菌株改良Hodge實(shí)驗(yàn)均為陽性，且均攜帶blaKPC-2基因，菌株動(dòng)

5、力實(shí)驗(yàn)及鞭毛染色均為陰性;Southern印跡雜交表明blaKPC-2基因分別定位在約為(26kb，55kb，139kb)不同大小質(zhì)粒上;部分菌株在攜帶blaKPC-2基因的質(zhì)粒上同時(shí)攜帶blaTEM-1、 blaCTx-M-65、 rmtB等多種耐藥基因;攜帶blaKPC-2基因菌株周圍結(jié)構(gòu)顯示，其上游含有插入元件ISKpn8，下游則由插入元件ISKpn6-like構(gòu)成，該結(jié)構(gòu)易導(dǎo)致耐藥基因在種屬間水平傳播。臨床資料回顧發(fā)現(xiàn)，該類細(xì)菌