變形桿菌整合子分型及質(zhì)粒介導的喹諾酮耐藥機制研究.pdf

1、變形桿菌是臨床上重要的病原菌，包括4個種：普通變形桿菌(P.vulgaris)、奇異變形桿菌、產(chǎn)粘變形桿菌和潘氏變形桿菌，其中奇異變形桿菌是易引起尿路感染且難以治愈的一種病原菌。 抗生素的過度使用和誤用造成了細菌多重耐藥菌株的出現(xiàn)。最近幾年，有著可移動DNA元件的新系統(tǒng)一整合子被提出。整合子由特殊的結(jié)構(gòu)組成：兩端保守區(qū)域框定了一個含有中間未知的開放讀碼框或“基因盒”，這些基因編碼了特定的抗生素耐藥。通過整合子的整合作用，抗性基因

2、之間能夠互相交換。整合子已被證實了多重耐藥的獲得和水平傳播起著重要作用。 喹諾酮類藥物是第一個完全人工合成的抗菌藥物，被廣泛應用于各種類型臨床感染的治療。隨著喹諾酮類藥物的應用，變形桿菌對喹諾酮類藥物敏感性下降或耐藥的臨床分離株在不斷增多。變形桿菌對喹諾酮類的耐藥機制非常復雜，迄今為止，喹諾酮類的耐藥機制主要有兩個方面：藥物作用靶位點的改變和菌體內(nèi)藥物濃度的降低，后者又可以由細胞外膜孔道蛋白的丟失和外排泵系統(tǒng)的表達引起。這兩類耐

3、藥機制都是由染色體基因突變引起，不具有水平傳播性。 1998年Martinez-Martinez等發(fā)現(xiàn)在一株臨床分離的肺炎克雷伯菌中一個低水平的喹諾酮耐藥可通過質(zhì)粒所轉(zhuǎn)移，該基因被命名為喹諾酮類藥物耐藥基因qnr，其作用機制是保護喹諾酮類藥物靶位點DNA解旋酶和/或拓撲異構(gòu)酶Ⅳ。使喹諾酮類藥物不易與其結(jié)合，從而導致藥物治療失敗。對該基因結(jié)構(gòu)分析表明，它一般位于Ⅰ類整合子，常與其他耐藥基因共存，最常見的是ESBLs基因。qnr基因

4、在世界各地如東亞、美洲、歐洲等地相繼被分離，越來越引起廣泛關(guān)注，隨后，兩個新的Qnr同族體QnrB和QnrS相繼被報道，原qnr基因命名為qnrA。目前國內(nèi)關(guān)于變形桿菌攜帶qnr基因尚未有報道，我們對來自安徽細菌耐藥中心(2004年10月~2006年10月)安徽省細菌耐藥監(jiān)控41家網(wǎng)絡(luò)醫(yī)院分離的146株變形桿菌進行了耐藥性及其1、2類整合子基因和qnr基因的檢測。 目的： 了解臨床分離變形桿菌中1、2類整合子的流行現(xiàn)狀以

5、及其耐藥性。研究臨床分離變形桿菌質(zhì)粒介導的喹酮類耐藥基因(qnr基因)存在情況。 材料與方法： 收集2004年10月至2006年10月安徽省細菌耐藥監(jiān)控41家網(wǎng)絡(luò)醫(yī)院分離的146株變形桿菌。PCR擴增146株變形桿菌中1、2類整合酶基因，M-H肉湯微量稀釋法檢測146株變形桿菌的藥敏情況。用聚合酶鏈反應(PCR)對146株變形桿菌細菌進行qnr基因檢測。藥敏檢測采用M-H肉湯微量稀釋法。堿裂解法提取質(zhì)粒，氯化鈣法制備感受

6、態(tài)細胞。 結(jié)果： 1類整合子檢出率36.9％(54/146)，2類整合子檢出率38.4％(56/146)，同時攜帶1、2類整合子的檢出率18.5％(27/146)。146株變形桿菌中有3株檢測出qnr基因：分別為qnrA、qnrB2、qnrS1，其中有1株同時攜帶qnrB2和qnrS1。qnrB2在第259位堿基發(fā)生C→A(精氨酸→絲氨酸)突變，三種qnr基因序列已在基因庫注冊，授權(quán)號：EF488761，EF488762