羅格列酮對(duì)凝血酶激活的小膠質(zhì)細(xì)胞PPARγ表達(dá)的影響及其抗氧化應(yīng)激機(jī)制.pdf

1、目的：
　　體外原代培養(yǎng)新生大鼠腦小膠質(zhì)細(xì)胞，采用凝血酶激活，觀察羅格列酮預(yù)處理對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞PPARγ、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS表達(dá)的影響，探討羅格列酮預(yù)處理對(duì)凝血酶激活小膠質(zhì)細(xì)胞抗氧化的反應(yīng)機(jī)制。
　　方法:
　　用新生的SD大鼠的腦組織，體外培養(yǎng)原代神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，14 d左右分離收集小膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞鑒定成功，分為5組：正常對(duì)照組（對(duì)照組）、凝血酶刺激組（刺激組）、羅格列酮干預(yù)組（羅格列酮+

2、凝血酶組）、維甲酸干預(yù)組（維甲酸+凝血酶組）、萊菔硫烷干預(yù)組（萊菔硫烷+凝血酶組）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組加入與刺激組所加凝血酶等體積的培養(yǎng)基，刺激組予凝血酶（20U/ml）處理24h，羅格列酮干預(yù)組用羅格列酮（25μmmol/L）預(yù)處理1h后再用凝血酶（20U/ml）刺激小膠質(zhì)細(xì)胞24h，維甲酸干預(yù)組用維甲酸（1μmmol/L）預(yù)處理1 h后再用凝血酶（20 U/mL）刺激小膠質(zhì)細(xì)胞24 h，萊菔硫烷干預(yù)組用萊菔硫烷（5μmmol/L）預(yù)處理

3、1h后再用與刺激組等量凝血酶刺激小膠質(zhì)細(xì)胞24h。分別采用免疫組化染色、real time-PCR、Western-blot檢測(cè)各組PPARγ、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS的表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　免疫組化染色顯示，與對(duì)照組比較，刺激組、羅格列酮+凝血酶組、維甲酸+凝血酶組及萊菔硫烷+凝血酶組的PPARγ、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS染色細(xì)胞數(shù)均增多；real time-PCR結(jié)果顯示羅

4、格列酮+凝血酶組PPARγ mRNA表達(dá)均顯著高于對(duì)照組、刺激組、維甲酸+凝血酶組及萊菔硫烷+凝血酶組（P<0.01）；萊菔硫烷+凝血酶組Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS的mRNA表達(dá)均較對(duì)照組、刺激組、羅格列酮+凝血酶組及維甲酸+凝血酶組升高（P<0.01）；Western blot結(jié)果顯示，羅格列酮+凝血酶組PPARγ的蛋白表達(dá)也明顯高于對(duì)照組、刺激組、維甲酸+凝血酶組及萊菔硫烷+凝血酶組（P<0.01）；萊菔硫烷+凝血酶組