羅格列酮對(duì)OLETF鼠糖尿病發(fā)病的干預(yù)作用及其機(jī)制研究——羅格列酮對(duì)OLETF鼠炎癥介質(zhì)和PPARγ表達(dá)的影響.pdf

1、[背景]隨著生活水平的提高和生活方式的改變，糖尿病的發(fā)病率逐年上升，已成為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病。胰島素、促胰島素分泌劑、胰島素增敏劑等藥物的不斷開(kāi)發(fā)與應(yīng)用，DM的治療領(lǐng)域有了前所未有的改觀，但目前尚無(wú)有效手段控制DM及其并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。DM能否預(yù)防，什么是最為有效的預(yù)防手段已成為亟待解決的問(wèn)題。循證醫(yī)學(xué)研究表明，占全部DM患者90％以上的2型糖尿病(T2DM)是可以預(yù)防的，采取恰當(dāng)?shù)母深A(yù)措施可以降低發(fā)

2、病危險(xiǎn)31％-58％。因此，探討T2DM的預(yù)防成為一個(gè)重要課題。 T2DM的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全清楚，在其發(fā)病機(jī)理和病理生理中，胰島素抵抗(IR)和胰島β細(xì)胞的功能障礙是兩個(gè)主要環(huán)節(jié)。近年來(lái)，炎癥反應(yīng)在DM發(fā)生、發(fā)展中的作用及其與DM危險(xiǎn)因素關(guān)系問(wèn)題的研究受到廣泛關(guān)注。早在1950年，就有人發(fā)現(xiàn)水楊酸類(lèi)抗炎藥物具有降低血糖的潛能，T2DM患者給予大量水楊酸類(lèi)制劑，可顯著改善糖脂代謝異常和胰島素抵抗。20世紀(jì)90年代初，有報(bào)道某些

3、促炎癥細(xì)胞因子包括腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)、干擾素(INF)等，在多種組織中影響葡萄糖濃度的穩(wěn)定性。目前大量流行病學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)科學(xué)的研究表明T2DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)理與炎癥有關(guān)，T2DM是細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，或者說(shuō)是一種與先天性免疫系統(tǒng)(ⅡS)有關(guān)的疾病，炎癥在DM的發(fā)病機(jī)制中有重要的作用。 馬來(lái)酸羅格列酮(RSG)，是作用最強(qiáng)的噻唑烷二酮類(lèi)藥物，其作用靶點(diǎn)為過(guò)氧化物酶體

4、增殖物激活受體(,PPAR)γ，PPARγ是一種新的甾體激素受體，其結(jié)構(gòu)與糖皮質(zhì)激素受體等核受體家族類(lèi)似，主要在與胰島素作用有關(guān)的組織中表達(dá)，并且具備激活后調(diào)控涉及葡萄糖的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)運(yùn)、利用及脂肪代謝的調(diào)節(jié)等基因的表達(dá)。有研究表明羅格列酮通過(guò)與PPARγ結(jié)合，激活PPARγ的生物學(xué)活性，起到抗炎作用，而其抗炎作用獨(dú)立于降糖效應(yīng)外。因此，本實(shí)驗(yàn)以炎癥為切入點(diǎn)，觀察羅格列酮對(duì)DM大鼠炎癥介質(zhì)的干預(yù)作用，及其對(duì)T2DM發(fā)病的預(yù)防效應(yīng)。

5、為更好觀察羅格列酮的藥物干預(yù)作用，選取了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的慢性自發(fā)性2型糖尿病大鼠模型之一OLETF鼠及其同種系糖耐量正常LETO大鼠，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，首先建立T2DM動(dòng)物模型，觀察OLETF大鼠T2DM發(fā)病全過(guò)程的病理生理改變；檢測(cè)血清炎癥介質(zhì)的水平，觀察其動(dòng)態(tài)變化過(guò)程；同時(shí)在DM發(fā)病初期應(yīng)用羅格列酮進(jìn)行干預(yù)治療，觀察羅格列酮對(duì)DM發(fā)病的干預(yù)作用；觀察羅格列酮對(duì)血清各炎癥介質(zhì)的干預(yù)作用；最后應(yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的方法，定量檢

6、測(cè)大鼠全身多個(gè)組織PPARγmRNA的表達(dá)水平，從分子生物學(xué)水平探討羅格列酮對(duì)DM發(fā)病、對(duì)炎癥介質(zhì)干預(yù)作用的可能機(jī)制，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用羅格列酮干預(yù)治療T2DM積累實(shí)驗(yàn)室資料。具體研究分以下三個(gè)部分： 第一章羅格列酮對(duì)OLETF鼠糖尿病發(fā)病的干預(yù)作用 [目的]建立以O(shè)LETF大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的動(dòng)物模型，應(yīng)用羅格列酮進(jìn)行干預(yù)治療，觀察羅格列酮對(duì)T2DM發(fā)病的預(yù)防作用，為臨床早期藥物干預(yù)治療提供動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)資料。 第二章

7、羅格列酮對(duì)OLETF鼠糖尿病發(fā)病過(guò)程中炎癥介質(zhì)的影響 [目的]探討炎癥介質(zhì)與T2DM之間的關(guān)系，進(jìn)一步研究T2DM免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制；觀察羅格列酮對(duì)血清炎癥介質(zhì)的干預(yù)作用，探討羅格列酮對(duì)T2DM的抗炎作用的影響。 第三章羅格列酮對(duì)OLETF鼠各組織中PPARγmRNA表達(dá)的影響 [目的]應(yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的方法，檢測(cè)PPARγmRNA在LETO和0LETF大鼠全身多個(gè)組織中的絕對(duì)表達(dá)水平，觀察羅

8、格列酮對(duì)PPARγmRNA表達(dá)的干預(yù)作用，探討羅格列酮預(yù)防T2DM、抑制炎癥反應(yīng)的可能分子生物學(xué)機(jī)制。 [結(jié)論] 1、成功建立了OLETF大鼠的T2DM動(dòng)物模型，完整觀察到OLETF大鼠由NGT發(fā)展到IGT，進(jìn)而發(fā)展為DM全過(guò)程的病理生理改變。 2、羅格列酮可以顯著降低OLETF鼠血糖升高程度，延緩高血糖出現(xiàn)的時(shí)間，并顯著降低T2DM的發(fā)病率，表明該藥可以有效預(yù)防OLETF鼠DM的發(fā)病，而且這種預(yù)防作用與減少大鼠

9、攝食量和降低其體重?zé)o關(guān)。此外，羅格列酮可以顯著性降低大鼠血清甘油三酯、膽固醇、游離脂肪酸和血漿胰島素水平。 3、OLETF大鼠血清hsCRP、TNF-α、IL-6、MCP-1水平顯著升高，并隨大鼠周齡的增加而升高，提示炎癥介質(zhì)參與T2DM的發(fā)生和發(fā)展。此外，血清炎癥介質(zhì)hsCRP、IL-6與ISI呈負(fù)相關(guān)，表明炎癥介質(zhì)與胰島素抵抗有關(guān)。 4、羅格列酮可以顯著降低OLETF鼠血清炎癥介質(zhì)水平的升高，提示該藥有明顯的抗炎作用

10、。 5、應(yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)對(duì)大鼠各組織PPARγmRNA表達(dá)水平進(jìn)行絕對(duì)定量分析，結(jié)果提示OLETF大鼠組織中PPARγmRNA表達(dá)量的減少可能與其T2DM的發(fā)病相關(guān)。 6、羅格列酮可以提高OLETF大鼠全身多組織中PPARγmRNA的表達(dá)水平，這可能與其預(yù)防DM的發(fā)病及抗炎的分子機(jī)制有關(guān)。 7、PPARγmRNA在腹主動(dòng)脈中有表達(dá)，提示PPARγ功能可能與血管功能相關(guān)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)干預(yù)組血