熱量限攝對氧化應(yīng)激與抗氧化系統(tǒng)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景：許多疾病，如高血壓、糖尿病、動脈粥樣硬化及神經(jīng)退行性病，都與個體的老化有密切關(guān)系，被稱為老化相關(guān)疾病(age-related diseases，ARD)。盡管采用多種防治措施，這些ARD在全世界仍然具有很高的發(fā)病率，給社會和家庭帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。研究證明熱量限攝(caloric restriction，CR)能夠延緩衰老，推遲ARD的發(fā)生，延長多種模式動物的壽命，是衰老及ARD的最有效的干預(yù)措施。盡管目前已經(jīng)有大量的研究，但CR

2、的有效作用機(jī)制并不清楚。近期研究發(fā)現(xiàn)CR可能通過減輕氧化應(yīng)激來延長壽命。因為氧化應(yīng)激可由自由基產(chǎn)生過多引起，或因抗氧化防御系統(tǒng)下降而致，所以在本文中我們區(qū)分了這樣的可能性。我們的結(jié)果證明CR減輕氧化應(yīng)激伴隨著ROS的減少和抗氧化系統(tǒng)表達(dá)的上調(diào)，且轉(zhuǎn)錄因子FOXO3a和SIRT2是調(diào)控這個過程的重要分子。
　　 目的：闡明熱量限攝減輕氧化應(yīng)激以及上調(diào)抗氧化系統(tǒng)的機(jī)制，為尋找新穎有效的延緩衰老藥物靶點(diǎn)提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方

3、法：我們將C57雌性小鼠分為正常組，CR組，CR+VC組。正常組喂普通飲食，CR組喂60％的普通飲食。我們將動物斷頸處死，分別在1天、2天、3天、7天、21天、28天這7個時間點(diǎn)取其肝臟、腎臟、卵巢。我們利用DCFA作為熒光探針，通過流式細(xì)胞儀來檢測肝臟線粒體中ROS的生成量。同時我們運(yùn)用real-time PCR技術(shù)檢測幾個抗氧化基因及SIRT2、FOXO3a的動態(tài)變化。此外，我們還運(yùn)用過表達(dá)技術(shù)和siRNA干擾技術(shù)對SIRT2進(jìn)行過

4、表達(dá)和敲除，從這兩方面來探索SIRT2調(diào)控氧化應(yīng)激的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：我們的結(jié)果表明在限食一個月后，CR對本文中涉及到的大多數(shù)基因的改變接近穩(wěn)態(tài)值。CR組的小鼠肝臟線粒體中ROS的生成量在第一天顯著降低并在整個實驗期間維持低水平。然而，不同限食組織中抗氧化系統(tǒng)的變化趨勢是有區(qū)別的。在肝臟和腎臟中，抗氧化基因經(jīng)歷了起初的降低，然后逐漸恢復(fù)并有升高趨勢的動態(tài)過程；在卵巢中，這幾個抗氧化基因進(jìn)行著時而上升時而下降的周期振蕩。而S

5、IRT2在這三種組織中的表達(dá)量的變化趨勢與相應(yīng)組織中抗氧化基因的變化趨勢是一致的。與此同時，VC對CR作用的影響在三種組織中也是有差別的。在肝臟中，VC能加強(qiáng)CR對抗氧化系統(tǒng)的作用；在腎臟中，VC對抗氧化系統(tǒng)的的作用與CR是相反的；在卵巢中，VC也能加強(qiáng)CR對抗氧化系統(tǒng)的作用。且VC對CR在SIRT2表達(dá)量方面的影響與在抗氧化系統(tǒng)方面的影響是相一致的。另外在限食一個月期間，小鼠的體重均處于下降狀態(tài)。最后，我們利用體外表達(dá)系統(tǒng)探索了氧化應(yīng)