基于活性指數(shù)和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的桂枝加芍藥湯抗炎活性成分快速發(fā)現(xiàn)研究.pdf

1、中藥方劑活性成分發(fā)現(xiàn)是中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容。目前，中藥活性成分發(fā)現(xiàn)的主要方法有系統(tǒng)分離法、活性導(dǎo)向法、生物色譜法等，前兩種方法研究周期長(zhǎng)、耗時(shí)耗力、命中率低，生物色譜法可以從混合物中快速發(fā)現(xiàn)含量較高的潛在活性成分，但可能會(huì)忽略某些微量活性成分。為克服以上研究方法的不足之處，本論文通過(guò)采用活性指數(shù)方法評(píng)價(jià)中藥及其組分中各成分對(duì)其活性的貢獻(xiàn)，從而預(yù)測(cè)其中潛在活性成分，并將該研究思路用于仲景方桂枝加芍藥湯中抗炎活性成分的快速發(fā)現(xiàn)。

2、　　桂枝加芍藥湯出自于《傷寒論》，由桂枝、白芍、生姜、大棗和甘草組成，具有溫脾和中，緩急止痛的功效。臨床上主要用于治療腹?jié)M引起的脹痛，還可以治療頑固性菌痢，十二指腸球部潰瘍，結(jié)核性腹膜炎等疾病。目前該方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚。本論文以桂枝加芍藥湯為研究對(duì)象，以方劑中抗炎活性成分的快速發(fā)現(xiàn)為研究目標(biāo)，具體研究如下:
　　采用液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(LC-Q-TOF-MS)和液相色譜-離子阱質(zhì)譜(LC-IT-MS)聯(lián)用方法對(duì)桂枝

3、加芍藥湯總提物中化學(xué)成分進(jìn)行了分析。共檢測(cè)到72個(gè)化合物，鑒定和推測(cè)了其中54個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，主要類(lèi)型包括單萜苷類(lèi)、三萜皂苷類(lèi)、黃酮及其苷類(lèi)和有機(jī)酸及其苷類(lèi)。
　　采用大孔樹(shù)脂和制備液相色譜方法將桂枝加芍藥湯總提物分段制備成64個(gè)組分。利用LC-IT-MS對(duì)各個(gè)組分的化學(xué)成分進(jìn)行表征，一共檢測(cè)到903個(gè)化合物。采用細(xì)菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥模型，對(duì)桂枝加芍湯湯組分的抗炎活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。最后整合組分的化學(xué)信

4、息和藥理信息，計(jì)算各成分的活性指數(shù)，發(fā)現(xiàn)61個(gè)化合物有較高的活性指數(shù)值，推測(cè)這些化合物可能是潛在的抗炎活性成分。
　　為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果，對(duì)其中8個(gè)化合物進(jìn)行了LC-MS導(dǎo)向的半制備液相色譜分離制備，采用NMR譜鑒定其結(jié)構(gòu)，利用LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7的炎癥模型進(jìn)行抗炎活性驗(yàn)證。研究發(fā)現(xiàn)，8個(gè)化合物均有良好的抗炎活性，其中6個(gè)化合物的抗炎活性明顯強(qiáng)于陽(yáng)性藥吲哚美辛。此外，3個(gè)化合物的抗炎活性為首次報(bào)道。本研究結(jié)果表明活