金福安湯通過(guò)調(diào)控P120ctn及其轉(zhuǎn)錄因子Kaiso干預(yù)肺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　課題組前期的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，金福安湯不僅下調(diào)Lewis小鼠肺癌組織p120ctn的異位表達(dá)，還降低A549細(xì)胞p120ctn磷酸化程度，而p120ctn又是Kaiso重要的和肺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的結(jié)合蛋白，推測(cè)金福安湯可能是通過(guò)調(diào)控p120ctn及其轉(zhuǎn)錄因子Kaiso的表達(dá)而干預(yù)肺癌轉(zhuǎn)移的。本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察金福安湯對(duì)肺癌各種細(xì)胞系的增殖、遷移和侵襲能力的影響，探究p120ctn各亞型、其相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Kaiso和p12

2、0ctn絲氨酸288位點(diǎn)的磷酸化的表達(dá)，以探究金福安湯是通過(guò)連環(huán)蛋白p120ctn的哪些亞型發(fā)揮作用，和其如何調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子Kaiso發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，以及其如何通過(guò)影響p120ctn絲氨酸288位點(diǎn)的磷酸化狀態(tài)來(lái)干預(yù)肺癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制，為揭示中藥復(fù)方干預(yù)肺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究提供了理論支持和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　將人肺腺癌細(xì)胞株H1299、H1650和A549細(xì)胞以及人肺鱗癌細(xì)胞株H520進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)傳代。運(yùn)用CCK8法觀

3、察金福安湯對(duì)不同類(lèi)型肺癌細(xì)胞增殖能力的抑制作用。通過(guò)體外基質(zhì)膠遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell)檢測(cè)金福安湯對(duì)各種類(lèi)型肺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。運(yùn)用免疫熒光、Western-Blot方法探討金福安湯對(duì)不同肺癌細(xì)胞中p120ctn、p120ctn亞型1A(p120ctn1A)、p120ctn亞型3A(p120ctn3A)和相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Kaiso的表達(dá)以及p120ctn絲氨酸288位點(diǎn)的磷酸化的影響。
　　結(jié)果:
　　1.

4、金福安湯對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株H1299、H1650和A549細(xì)胞以及人肺鱗癌細(xì)胞株H520有增殖抑制作用，且不僅具有一定的時(shí)間依賴性還具有一定的濃度依賴性（p＜0.05），順鉑組也能顯著抑制各肺癌細(xì)胞的增殖能力，其和空白對(duì)照組相比均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　2.體外基質(zhì)膠遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中，中藥金福安湯低、中、高劑量組可發(fā)現(xiàn)不同類(lèi)型肺癌細(xì)胞株中遷移和穿透小室底部的細(xì)胞數(shù)目均在下降，且遷移和侵襲能力的抑制作用隨著濃度的增

5、加逐漸增強(qiáng)(p＜0.05)，順鉑也可抑制肺癌細(xì)胞遷移和侵襲，與空白對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3.免疫熒光結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組中的人肺鱗癌細(xì)胞H520和人肺腺癌細(xì)胞H1650中的連環(huán)蛋白p120ctn在細(xì)胞漿和細(xì)胞膜上均呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，呈現(xiàn)強(qiáng)表達(dá)，而在細(xì)胞核的綠色熒光較弱，而肺腺癌H1299細(xì)胞中空白對(duì)照組中的p120ctn蛋白表達(dá)主要定位于胞漿和胞核，細(xì)胞膜幾乎不表達(dá)，并且胞漿和胞核的熒光強(qiáng)度較弱。

6、我們還觀察到在空白對(duì)照組中肺腺癌H1299、H650細(xì)胞及鱗癌細(xì)胞H520中Kaiso的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)H1299中Kaiso主要表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)，弱表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，卻還發(fā)現(xiàn)Kaiso在H520和H1650中的表達(dá)很弱，而且主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。但中藥組處理后的肺癌不同類(lèi)型細(xì)胞系H1299和H520中連環(huán)蛋白p120ctn和Kaiso的表達(dá)較空白對(duì)照組明減少，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），而在H1650中連環(huán)蛋白p120ctn的表達(dá)下調(diào)，但K

7、aiso的表達(dá)水平是增加的。
　　4.Western-Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)金福安湯可下調(diào)肺癌細(xì)胞系H1299、A549、H1650和H520中的連環(huán)蛋白p120ctn和其p120ctn亞型1A(p120ctn1A)的表達(dá)，減弱其相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Kaiso的表達(dá)，而處理后的H1650細(xì)胞中Kaiso的表達(dá)水平卻增高。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)金福安湯可減弱連環(huán)蛋白p120ctn絲氨酸288位點(diǎn)的磷酸化的程度。
　　結(jié)論:
　　1.在體外實(shí)驗(yàn)研究

8、中，我們發(fā)現(xiàn)金福安湯可顯著抑制人肺腺癌細(xì)胞株H1299、H1650和A549細(xì)胞以及人肺鱗癌細(xì)胞株H520的生長(zhǎng)和增殖能力，具有一定的時(shí)間依賴性和濃度依賴性，還發(fā)現(xiàn)金福安湯可顯著抑制肺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力。
　　2.金福安湯可能通過(guò)介導(dǎo)與肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的連環(huán)蛋白p120ctn及p120ctn1A的表達(dá)來(lái)調(diào)控其相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Kaiso的表達(dá)水平來(lái)降低肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力從而干預(yù)肺癌的轉(zhuǎn)移。
　　3.我們還發(fā)現(xiàn)金