沖擊流場(chǎng)作用下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞P120連環(huán)蛋白及轉(zhuǎn)錄因子Kaiso亞細(xì)胞定位的初步研究.pdf

1、目的：
　　顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成的具體機(jī)制仍在探索。目前認(rèn)為血流動(dòng)力學(xué)因素所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及相關(guān)炎癥反應(yīng)是顱內(nèi)動(dòng)脈瘤形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)。我們前期研究顯示沖擊流作用下培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞P120連環(huán)蛋白（P120-catenin，p120ctn）及轉(zhuǎn)錄因子Kaiso的表達(dá)均減少。本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察沖擊流作用下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）p120ctn及Kaiso的亞細(xì)胞定位的變化，探究p120ctn及Kaiso參與調(diào)控血流動(dòng)力學(xué)所

2、致內(nèi)皮細(xì)胞受損的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）及運(yùn)用shRNA CTNND1重組慢病毒轉(zhuǎn)染的 HUVEC。分別將上述兩種細(xì)胞種植在涂有纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）的普通載玻片上，待細(xì)胞90％以上融合后，將載玻片置入沖擊流作用下內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)裝置。對(duì)照組不加載沖擊流，實(shí)驗(yàn)組加載流速為500ml/min的沖擊流作用于HUVEC3小時(shí)和6小時(shí)。運(yùn)用蛋白免疫印跡和免疫細(xì)胞化學(xué)

3、檢測(cè)p120ctn和Kaiso在細(xì)胞胞漿及胞核的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　（1）在沖擊流作用下培養(yǎng)6小時(shí)后，可見(jiàn)沖擊點(diǎn)處細(xì)胞的形態(tài)及細(xì)胞間粘附維持正常；其臨近區(qū)域的細(xì)胞密度明顯降低，可見(jiàn)細(xì)胞變圓，且大部分被沖散；而下游區(qū)域的細(xì)胞密度增大，部分細(xì)胞生長(zhǎng)排列與沖擊流方向大致相同。
　　（2）蛋白免疫印跡分析顯示：對(duì)照組HUVEC的胞質(zhì)及胞核內(nèi)均表達(dá)p120ctn和Kaiso。與對(duì)照組相比，隨著沖擊流作用時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組H

4、UVEC內(nèi)p120ctn在胞質(zhì)表達(dá)下降，在胞核表達(dá)增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Kaiso在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)無(wú)明顯變化（P＞0.05），而在胞核內(nèi)表達(dá)增多（P＜0.05）。運(yùn)用shRNA CTNND1重組慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC后，與正常HUVEC對(duì)比，其p120ctn蛋白表達(dá)顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）免疫細(xì)胞化學(xué)顯示：對(duì)照組HUVEC內(nèi)p120ctn主要在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)；Kaiso主要在胞核周?chē)磉_(dá)，在胞核

5、內(nèi)少量表達(dá)。與對(duì)照組相比，隨著沖擊流作用時(shí)間延長(zhǎng)，p120ctn在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)減少，在胞核內(nèi)表達(dá)明顯增多；Kaiso在胞核周?chē)磉_(dá)減弱，而在胞核中表達(dá)有增多的趨勢(shì)。運(yùn)用shRNA CTNND1重組慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC后，p120ctn表達(dá)明顯減弱，且Kaiso在細(xì)胞核表達(dá)增多的趨勢(shì)減弱。
　　結(jié)論：
　　沖擊流作用下，隨著加載沖擊流時(shí)間的延長(zhǎng)，HUVEC內(nèi)p120ctn可能發(fā)生質(zhì)核穿梭，由胞質(zhì)進(jìn)入胞核內(nèi)。敲除p120ctn基因