血清淀粉樣蛋白A對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響研究初探.pdf

1、冠狀動(dòng)脈疾病(Coronary Artery Disease，CAD)是最常見的心血管疾病，越來越受到全球人民的關(guān)注。冠心病的主要機(jī)制是動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)。為了更好地治療和預(yù)防AS，對(duì)AS形成過程的研究是十分有必要的。過去的研究證明，在AS形成過程中，一直有炎癥分子的參與。因此，AS現(xiàn)在被認(rèn)為是一種慢性炎癥疾病。在炎癥刺激下C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)和血清淀粉樣蛋白A(

2、serum amyloid a，SAA)都能大量表達(dá)，而目前CRP已經(jīng)被認(rèn)為是一種能直接導(dǎo)致冠心病的危險(xiǎn)因子。然而對(duì)SAA的研究卻相對(duì)較少，尤其在AS形成的直接作用方面。我們認(rèn)為SAA可能對(duì)AS的形成有直接的作用。本文旨在探討SAA在誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥過程中的直接作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行一定的研究；探討SAA在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達(dá)以及一氧化氮合成中的作用；并對(duì)SAA和肥胖的相關(guān)性進(jìn)行一定的研究。為臨床治療冠心

3、病提供一定的依據(jù)。本研究主要從三個(gè)方面展開工作。
　　 第一部分血清淀粉樣蛋白A對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)的影響研究
　　 本章節(jié)主要研究血清淀粉樣蛋白A對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)粘附分子表達(dá)的影響，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行一定的探討。用不同濃度的SAA作用體外培養(yǎng)的HUVEC，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)的方法檢測(cè)細(xì)胞間粘附分子

4、-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)、血管粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)和E-選擇素(E-selectin)的mRNA的表達(dá)。用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)的方法檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白和分泌蛋白的表達(dá)。凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)的方法檢測(cè)核蛋白和DNA的相互作用。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示用20μg/mL的人重組SAA刺激顯著誘導(dǎo)了HUVEC的

5、ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的mRNA的轉(zhuǎn)錄，作用2小時(shí)后粘附分子表達(dá)顯著增多，并且在4-6小時(shí)達(dá)到高峰，8小時(shí)后開始下降。ELISA的結(jié)果顯示SAA作用4小時(shí)后，細(xì)胞表面粘附分子表達(dá)顯著增多(p<0.05），作用24小時(shí)后細(xì)胞分泌的粘附分子顯著增多(P<0.05)。用核因子NFκB抑制劑BAY-11-7082可以阻斷SAA的這種作用。EMSA的結(jié)果顯示SAA可以直接活化NFKB。因此，通過本節(jié)的實(shí)驗(yàn)證明SAA能顯著

6、誘導(dǎo)HUVEC粘附分子的表達(dá)，并且是通過NFκB途徑調(diào)控的。
　　 第二部分血清淀粉樣蛋白A對(duì)內(nèi)皮功能影響的研究
　　 本章節(jié)主要研究SAA對(duì)HUVEC的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行一定的探討。在培養(yǎng)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞中，用重組的人的SAA刺激，收獲不同干預(yù)時(shí)間的細(xì)胞和培養(yǎng)液，通過RT-PCR的方法檢測(cè)eNOS的mRNA轉(zhuǎn)錄水平；通過免疫印跡的方法來檢測(cè)eNOS蛋白的表達(dá)量；通過比色分析的方法來

7、測(cè)定一氧化氮的產(chǎn)量：通過MTT法來測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SAA(≥10μg/mL)能顯著地抑制eNOS基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)(P<0.05）；減少一氧化氮的產(chǎn)量和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)證明SAA通過抑制eNOS的活性，減少一氧化氮的產(chǎn)量和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，使內(nèi)皮細(xì)胞功能受損。
　　 第三部分血清淀粉樣蛋白A和肥胖癥
　　 本章節(jié)主要是對(duì)已發(fā)表的一些研究進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，探討SAA和肥胖間的關(guān)系。在Pub

8、Med上以“serum amyloid A”和“obesity”為關(guān)鍵詞搜索。檢索到81篇從1966年1月到2009年7月的文章。其中只有11篇橫斷面調(diào)查研究和10篇成功的進(jìn)行了介導(dǎo)減肥的文章符合本次Meta分析的要求。對(duì)篩選出的文章提取數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析。通過對(duì)11個(gè)橫斷面調(diào)查研究的分析發(fā)現(xiàn)SAA和體質(zhì)指數(shù)(Body MassIndex，BMI)之間具有正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)：0.230(95％置信區(qū)間0.160-0.297，P<0.0