轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究.pdf

1、細(xì)胞自噬是一種在進(jìn)化上高度保守的、維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的生理過程，可以使細(xì)胞內(nèi)部的長壽命蛋白、受損的細(xì)胞器等通過溶酶體降解。自噬與去除和降解錯誤折疊的蛋白質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有著重要的聯(lián)系，然而對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在受到脅迫時如何引發(fā)和調(diào)控自噬的分子機(jī)制還不是完全清楚。很多研究表明磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)和雷帕霉素靶蛋白質(zhì)(TOR)在自噬的調(diào)控中起著關(guān)鍵的作用。自噬對細(xì)胞生長、發(fā)育、再生、退行性疾病等的調(diào)控已經(jīng)被廣泛研究，但是在靜息的細(xì)胞中，

2、自噬調(diào)控的方式仍不清楚。
　　由于鹵蟲在環(huán)境惡劣的條件下可以產(chǎn)生長時間靜息的休眠胚胎，因此我們選擇鹵蟲作為研究模型。我們發(fā)現(xiàn)，卵生途徑中，休眠胚胎形成前期，自噬水平逐漸升高，而在休眠胚胎中自噬基本檢測不到。Western blotting和RNA干涉檢測的結(jié)果表明，卵生鹵蟲自噬并不是AMPK/TOR調(diào)控的。同時我們發(fā)現(xiàn)與應(yīng)激相關(guān)的小分子轉(zhuǎn)錄因子p8(At-p8)的表達(dá)特征與休眠胚胎形成過程中自噬的變化水平相一致，在休眠胚胎形成前期

3、高量表達(dá)，但是在休眠胚胎中消失，暗示Ar-p8很可能與休眠胚胎形成過程中的自噬調(diào)控相關(guān)。使用雙鏈RNA將休眠胚胎形成前期的Ar-p8干涉后，發(fā)現(xiàn)與對照組高水平的自噬相比，干涉Ar-p8組自噬降低，同時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬相關(guān)的分子轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4)和轉(zhuǎn)錄因子6(ATF6)降低。進(jìn)一步我們在人胃癌細(xì)胞系MKN45中過表達(dá)Ar-p8和人源轉(zhuǎn)錄因子p8(Hu-p8)，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)Ar-p8和Hu-p8后腫瘤細(xì)胞自噬水平升高，但是AMPK/mTOR信號

4、通路并不發(fā)生變化。同時，我們分別使用平衡鹽緩沖液(EBSS)和棕櫚酸(PA)對細(xì)胞進(jìn)行脅迫處理，得到營養(yǎng)缺乏和脂肪毒性脅迫的細(xì)胞，引發(fā)自噬。Western blotting的結(jié)果顯示AMPK/mTOR參與調(diào)控由營養(yǎng)缺乏引發(fā)的自噬，而脂肪毒性引發(fā)的自噬則是經(jīng)由Hu-p8調(diào)控的。進(jìn)一步的研究顯示，AMPK/mTOR參與調(diào)控parkin介導(dǎo)的線粒體自噬，而Hu-p8參與調(diào)控由PERK/ATF6介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬。最后我們的研究確認(rèn)了一條由細(xì)胞脂