毛柄金錢(qián)菌子實(shí)體菌柄細(xì)胞壁伸長(zhǎng)生長(zhǎng)的研究.pdf

1、采用在離體條件下重組熱滅活的細(xì)胞壁伸長(zhǎng)生長(zhǎng)測(cè)定方法，從各種富含多糖水解酶的粗酶制劑中篩選到一種作用于毛柄金錢(qián)菌(金針菇，F(xiàn)lammulinavelutipes)菌柄細(xì)胞壁的伸長(zhǎng)蛋白，此蛋白能引起菌柄細(xì)胞壁的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。對(duì)篩選到的粗酶制劑通過(guò)Bio-GelP-60分子篩層析、DEAE-Cellulose離子交換層析以及高效液相色譜的SynchropakS300陽(yáng)離子交換層析，獲得電泳純的分子量約21KD的蛋白，此蛋白加入到細(xì)胞壁伸長(zhǎng)測(cè)定儀小

2、室溶液中可以立即引起菌柄細(xì)胞壁的快速伸長(zhǎng)。該蛋白不含幾丁質(zhì)酶活性，β-葡聚糖酶活性亦未發(fā)現(xiàn)，對(duì)木葡聚糖和葡甘露聚糖均無(wú)作用，在中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所蛋白質(zhì)組學(xué)研究分析中心利用LCQ-DECA-XP質(zhì)譜法對(duì)該蛋白進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)果表明現(xiàn)存蛋白質(zhì)庫(kù)中沒(méi)有匹配片斷；在哈佛大學(xué)該蛋白經(jīng)胰蛋白酶裂解后同時(shí)使用Edman與LS/MS/MS兩種方法測(cè)序，獲得兩個(gè)肽段，分別為EFHWAVPK七肽和MFSNDVLAR九肽的氨基酸序列，GenBank

3、中也沒(méi)有找到相同序列的蛋白，也未發(fā)現(xiàn)與之匹配的肽段，推測(cè)可能為一新蛋白。在篩選過(guò)程中另外發(fā)現(xiàn)了一種新的β-1，3-葡聚糖酶，在SDS-PAGE中呈現(xiàn)一條分子量為33kD的電泳條帶。此蛋白對(duì)微晶纖維素沒(méi)有水解酶活性但是對(duì)大麥β-葡聚糖有很強(qiáng)的水解酶活性，它不具有引起菌柄細(xì)胞壁伸長(zhǎng)的功能。特性研究表明該酶的最適溫度和最適pH分別為37℃和4.5，在pH低于8.0時(shí)酶較穩(wěn)定.通過(guò)質(zhì)譜LCQ-DECA-XP肽譜分析法未找到與之完全匹配的肽段，推