外用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對宮頸癌細胞株—hela生長的

1、1外用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對宮頸癌細胞株— 外用紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對宮頸癌細胞株—HeLa 生長的影響 生長的影響趙健 趙健 1 杜海軍 杜海軍 2 廖秦平 廖秦平 11 北京大學(xué)第一醫(yī)院 婦產(chǎn)科 北京大學(xué)第一醫(yī)院 婦產(chǎn)科2 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所 傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室[摘要 摘要] 目的 目的:探討紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(Nocardia

2、Rubra Cell WallSkeleton,Nr-CWS)對人乳頭狀瘤病毒陽性宮頸癌細胞系—HeLa 生長的影響。方法 方法: 體外培養(yǎng) HeLa 細胞, 并將細胞分為加藥組和對照組。利用 MTT 法檢測細胞的活力，繪制細胞生長曲線；流式細胞儀測定細胞處于周期各時相的比例。動物實驗觀察抑制腫瘤細胞生長的情況。結(jié)果 結(jié)果: MTT 法檢測結(jié)果顯示：兩組在不同時間點 OD490 光吸收值有顯著性差異，加藥物明顯抑制 HeLa 細胞生長。

3、流式細胞儀測定細胞周期各時相中，用藥組中處于靜止期（G0—G1）細胞明顯多于對照組，而增殖期（S＋G2—M）細胞明顯少于對照組。動物實驗表明：用藥組腫塊體積和體重均低于對照組。結(jié)論 結(jié)論: 紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對人乳頭狀瘤病毒陽性的宮頸癌細胞系— 紅色諾卡氏菌細胞壁骨架對人乳頭狀瘤病毒陽性的宮頸癌細胞系—HeLa 有抑制 有抑制作用。 作用。[關(guān)鍵詞 關(guān)鍵詞] 紅色諾卡氏菌細胞壁骨架 人乳頭狀瘤病毒 抑制作用全世界婦女中， HPV 感

4、染非常普遍， 每年約有 10%-15%的新感染病例 [1] 。 對于病毒的防治首選疫苗，但在 HPV 疫苗尚未問世之前， 抑制 HPV 增殖是我們所關(guān)心的問題。紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(Nocardia Rubra Cell Wall Skeleton, Nr-CWS)是一種從紅色諾卡氏菌中提取的細胞壁骨架成分，Nr-CWS 對機體免疫系統(tǒng)有一定的調(diào)節(jié)功能，可增強體內(nèi) T 細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞的活性，誘導(dǎo)體內(nèi)細胞間粘附分子-1、白

5、細胞介素-1 和干擾素-γ等細胞因子的表達 [2] 。本實驗通過 Nr-CWS 作用于體外培養(yǎng) HPV18 型陽性 HeLa 宮頸癌細胞， 探討 Nr-CWS 對人乳頭狀瘤病毒陽性宮頸癌細胞系—HeLa 生長的影響.一、材料與方法 材料與方法1. 實驗材料：DMEM 培養(yǎng)基(Gibco，USA)、胰蛋白酶（Sigma 分裝，USA） 、 MTT (Sigma 分裝，USA) 、胎牛血清（Hyclone, USA） 、二甲基亞砜(Sigm

6、a，USA)、96 孔板（Corning 公司）2. MTT 的配制：以 PBS 配制成 5mg/ml 貯存液，0.22μm 濾膜過濾除菌，4℃避光可以保存一周。3? 模型的制備：細胞接種密度為 106/只，一周以后（8-9 天）呈現(xiàn)肉眼可見腫塊。按臨床劑量開始在腫瘤部位注射藥物（納可佳 30ug/ml） ，2 次/周，四周后處死小鼠，量取瘤組織長、寬及瘤體重量。8. 統(tǒng)計學(xué)處理：采用 SPSS12.0 統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行配對 t

7、檢驗二、結(jié)果 二、結(jié)果1． 細胞生長與活力測定： 不同時間點 OD490 光吸收值如下(表 1.) 表格， 細胞生長曲線如圖 （圖1）所示，顯示實驗組（加藥組）與對照組明顯不同，藥物明顯抑制 HeLa 細胞生長。表 1. HeLa 細胞 OD490光吸收值組別 組別/時間 時間 24 hr 48 hr 72 hr 96 hr 120 hr對照組 對照組 0.46±0.03 0.75±0.01 0.98±0.

8、05 1.45±0.07 2.17±0.01實驗組 實驗組 0.38±0.02 0.53±0.01 0.66±0.02 1.07±0.1 2.10±0.0600.511.522.5對 照 組實 驗 組圖 1 HeLa 細胞生長曲線2． 統(tǒng)計學(xué)分析： 采用 SPSS10.0 統(tǒng)計軟件對各組數(shù)據(jù)進行配對 t 檢驗分析結(jié)果 （見表 2） ， P＜0.05表明兩組數(shù)據(jù)具有顯著