諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物對烏鱧免疫活性的影響【開題報告+文獻綜述+畢業(yè)設計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報告</b></p><p><b>　　水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p>　　諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物對烏鱧免疫活性的影響</p><p>　　一、選題的背景與意義 </p>

2、;<p>　　烏鱧（Ophicephalus argus），亦稱黑魚，屬鱸形目，攀鱸亞目，鱧科，鱧屬，體呈烏黑色，細長，前部圓筒狀，后部側扁，由背至腹顏色逐漸變淺，圓鱗。烏鱧分布極廣，除西部高原地區(qū)外，從黑龍江至海南的河川、湖泊、水庫、池塘等各種類型的水體皆產(chǎn)此魚，國外產(chǎn)于朝鮮西、南部。烏鱧肉富含蛋白質、脂肪、18種氨基酸等，還含有人體必需的鈣、磷、鐵及多種維生素，營養(yǎng)豐富、肉味甘性溫且骨刺少，有補脾、利水的藥用功能，深受

3、群眾的歡迎。烏鱧是一種適應性強、對不良水溫、水質及缺氧條件有較強耐受力的魚類，在江河湖塘等自然環(huán)境中很少發(fā)病。但隨著烏鱧人工高密度養(yǎng)殖的發(fā)展，烏鱧各種疾病頻頻發(fā)生，特別是水霉病、腐皮病、腹水病、爛鰓病危害嚴重，諾卡氏菌病也在近幾年流行起來，造成了很嚴重的經(jīng)濟損失。</p><p>　　諾卡氏菌（Nocardia）為革蘭氏陽性菌，好氧，分類上屬細菌域，厚壁菌門，放線菌綱，放線菌目，諾卡氏菌科。菌體呈長或短桿狀, 或

4、細長分枝狀，常斷裂成桿狀至球狀體，基絲發(fā)達，呈分枝狀，氣絲較少。魚類諾卡氏菌病于1963年在全球首次報告，確認于阿根廷熱帶養(yǎng)殖的虹彩脂魚（Hyphessobrycon innesi）（杜佳根 2007）。隨后此病又陸續(xù)發(fā)生在虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、黃尾鰤（Seriola lalandi）、烏鱧、大西洋牡蠣（Crassostrea gigas）、大口鱸（Micropterus salmoides）和海鱸（Lateo

5、labrax japonicus）等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中，曾影響日本、美國、澳大利亞、加拿大等地的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，造成很大經(jīng)濟損失（袁思平 2006）。該病曾是日本水產(chǎn)養(yǎng)殖中最主要的水產(chǎn)動物疾病之一, 也是大西洋牡蠣養(yǎng)殖的主要疾病。而該病近年來對我國臺灣水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)也產(chǎn)生了較大影響，先后在烏鱧、大口鱸和海鱸等養(yǎng)殖魚類中發(fā)生此病。我國大陸是2006年首次在養(yǎng)殖大黃魚中發(fā)現(xiàn)諾卡氏菌?。ㄍ鯂?2006）。</p><p>　　肽

6、聚糖( peptidoglycan) 又稱粘肽、胞壁質或粘質復合物，由雙糖單位，四肽尾還有肽橋聚合而成，是N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰胞壁酸（NAMA）交替連接的雜多糖與不同組成的肽交叉連接形成的多層網(wǎng)狀大分子結構。其是一種多糖與氨基酸相連的多糖復合物，由于此復合物中氨基酸鏈不像蛋白質中的那樣長，故稱肽聚糖。肽聚糖是許多細菌細胞壁的主要成分，不同的肽聚糖中出現(xiàn)的氨基酸數(shù)是有限的，亞肽單位及間肽橋上氨基酸的組成及排列上的不同，決定

7、了肽聚糖種類的多樣性(和致中　1992)。近年來的大量的研究結果表明，肽聚糖具有包括佐劑活性在內(nèi)的多種生物活性。肽聚糖能對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生不同的免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強機體免疫能力，是一種免疫系統(tǒng)的免疫增強劑。肽聚糖能夠刺激B、T 淋巴細胞，增強體液免疫和細胞免疫，激活單核細胞及多核白細胞的吞噬活性，活化補體(聞玉梅等　1992)，其分子中的多糖成分還具有抗腫瘤，抗感染能力（Takashi 1994）。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中投喂肽聚糖后發(fā)現(xiàn)，其能顯著提

8、高水產(chǎn)動物如五條鰤（Ttami 1996）、斑節(jié)對蝦（Sitdhi Boonyaratpalin 1995）、日本對</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　研究基本內(nèi)容：</b></p><p>　　1. 諾卡氏菌細胞壁肽聚糖的分離提取。</p><p>　　2. 通過

9、腹腔注射的方式，對烏鱧注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物，研究其對烏鱧免疫活性指標的影響。</p><p><b>　　擬解決的主要問題：</b></p><p>　　1.諾卡氏菌細胞壁肽聚糖的提取方法。</p><p>　　2. 烏鱧免疫活性指標的篩選及測定方法的建立。</p><p>　　三、研究的方法與技術路線：<

10、;/p><p><b>　　研究的方法:</b></p><p><b>　　1.試驗用魚：烏鱧</b></p><p>　　2.試驗用菌：鰤魚諾卡氏菌(Nacardia seriolea)</p><p>　　3.試劑與藥品：三氯乙酸（TCA）、胰蛋白酶磷酸緩沖液(3 mg/ mL 胰蛋白酶、0.1

11、mol/ L 磷酸緩沖液、pH 8.0)、肝素鈉、生理鹽水、白細胞稀釋液（冰醋酸1. 5 ml、1%龍膽紫1 ml、蒸餾水97.5ml）、溶壁微球菌( Microcrococcus lysodeikticus)、紅細胞稀釋液（NaCl 0. 5g、硫酸鈉2. 5g、氯化汞0. 25g、</p><p>　　蒸餾水加至100 ml）、溶壁微球菌營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（牛肉浸膏1. 5g、蛋白胨2. 5g、NaCl 4. 0

12、g、瓊脂7. 5g、蒸餾水500mL、pH = 7. 4）、丙酮、乙醚等。</p><p>　　4.主要器材：玻璃缸、注射器、生化自動分析儀、離心機、顯微鏡等</p><p><b>　　5. 實驗方法：</b></p><p>　　5.1諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物的制備：</p><p>　　參考宋曉玲等（2005）改

13、進的Park法。取離心洗滌得到的諾卡氏菌濕菌20g，懸浮于200mL 10 %三氯乙酸(TCA)溶液中，沸水浴20min以裂解菌體；冷卻后，1.2萬r/ min 離心15 min，收集不含磷壁酸的細胞壁沉淀，蒸餾水洗滌沉淀3次；沉淀溶于胰蛋白酶磷酸緩沖液(3 mg/ mL 胰蛋白酶；0.1 mol/ L 磷酸緩沖液；pH 8.0)中，37 ℃水浴振蕩3h，以3000r/min轉速離心5 min，棄去未溶解的胰蛋白酶沉淀。上清液1.2萬

14、r/min離心15 min，沉淀用蒸餾水洗2次，加入乙醚(除脂類物質)1.2萬r/min離心15min，70 ℃干燥脫水后，即得淡褐色膠質肽聚糖提取物。最后，將制備的肽聚糖干燥物用生理鹽水配成1%濃度的溶液，高溫高壓滅菌20min后備用。</p><p>　　5.2腹腔注射與血樣采集：</p><p>　　試驗分對照組和試驗組，每組50尾魚。試驗組腹腔注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物每尾0.

15、3mL，對照組以同量無菌生理鹽水注射。注射后分別于24h 、48h 、72h 、96h 、120h 、144h 、168h 時尾靜脈取血液樣本，每時間點每組取5 尾魚，實驗重復2次。</p><p>　　用肝素鈉作為血液抗凝劑，臀鰭尾端基部無鱗處穿刺抽血, 取得全血，測定紅細胞數(shù)量、脆性及白細胞數(shù)量等生理指標，當天完成測定；用5mL針筒尾靜脈取血（不抗凝），全血制備血清，4 ℃靜置過夜，吸出血清后3 000r/

16、min 離心，用于溶菌酶等生化指標的測定。</p><p>　　5.3溶壁微球菌粉末的制備：將溶壁微球菌涂布于營養(yǎng)瓊脂上，28 ℃下培養(yǎng)過夜，用無菌重蒸水將溶壁微球菌菌落從營養(yǎng)瓊脂平板上洗下來，2 500r/ min 離心15min ，去上清，用4mL 丙酮洗滌后，2 500r/ min 離心3min，去上清，重復2 次，再用4mL 乙醚洗滌，2 500r/ min 離心3min，重復1 次，把溶壁微球菌從離心管

17、中取出，放到研缽中，于28 ℃下干燥3h，把結塊的細菌磨成粉末分裝到小離心管中,4 ℃下保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　5.4免疫活性指標的測定</p><p>　　5.4.1紅細胞計數(shù)（RBC）：用紅細胞稀釋液將血液稀釋200倍，用Neubarner計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)。</p><p>　　5.4.2白細胞計數(shù)（WBC）：用Türk稀釋液將血液稀釋20

18、0倍，用Neubarner計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)。</p><p>　　5.4.3 紅細胞脆性( EOB): 將血液滴入濃度為0.20%～0.48% (梯度為0.02% )的NaCl溶液，以完全溶血的NaCl濃度作為紅細胞最大抵抗值。</p><p>　　5.4.4 溶菌酶活力測定：主要根據(jù)簡紀常的方法進行。用0. 067mol/ L PBS (pH 6. 4) 將溶壁微球菌配成0. 2mg

19、/ mL 的菌懸液，每個樣品取3mL 菌懸液，吸取40μL 血清加入到3mL 菌懸液中，混勻后立刻在540nm 下測定A0 值。然后在28 ℃水浴中溫浴30min，取出后置于4 ℃冰浴中以終止反應，再測定A值，按公式計算溶菌酶的活力：U = (A0 - A) / A。</p><p>　　5.4.5 血清酶類的測定：堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脫氫酶(LDH)等在生化自動分析儀上完成，具體方法

20、根據(jù)說明書進行。</p><p>　　5.數(shù)據(jù)處理與分析：：</p><p>　　利用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0對試驗結果進行分析。每個樣品進行3次平行測試取平均值，所有數(shù)據(jù)分析均采用單因素方差分析(one-factor analysis of variance)和Duncan檢驗法。</p><p><b>　　技術路線: </b></

21、p><p>　　四、研究的總體安排與進度：</p><p>　　2010年1月—2010年4月：</p><p>　　1.實驗前的準備工作：查找資料，寫開題報告和論文綜述；</p><p>　　2.儀器、藥品的準備和各種實驗材料的準備。</p><p>　　2010年5月—2010年12月：</p><

22、p>　　1. 諾卡氏菌細胞壁肽聚糖的分離提取。</p><p>　　2. 研究諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物對烏鱧免疫活性指標的影響。</p><p><b>　　3、翻譯外文文獻。</b></p><p>　　2011年1月—2011年4月：</p><p>　　1、補充相關數(shù)據(jù)，整理試驗結果；</p>

23、<p><b>　　2、撰寫論文初稿。</b></p><p>　　3、論文定稿，論文答辯。</p><p><b>　　五、主要參考文獻：</b></p><p>　　[1]陳曉耘. 魚類的血液[J].重慶師專學報, 2000,19(3):70-73.</p><p>　　[2]陳寅兒

24、,金珊,王國良. 鱸魚溶藻弧菌病的血液生理生化指標研究[J]. 臺灣海峽, 2005,(01):104-108</p><p>　　[3]陳國勝,谷欣,張想竹.細菌肽聚糖及其應用.安陽工學院學報.2007:36-38</p><p>　　[4]杜佳根.魚類諾卡氏菌病危害狀況與研究進展. 遼寧省大連市大連水產(chǎn)學院,2007(5):27-31</p><p>　　[5]

25、和致中. 1992. 細菌細胞壁肽聚糖的分類. 微生物學通報,19 (3):174-179</p><p>　　[6]金珊,蔡完其,王國良,等.養(yǎng)殖大黃魚細菌性疾病的病原研究 [J].浙江海洋學院學報, 2002 , 21(3) :225 - 231.</p><p>　　[7]金珊,王國良,趙青松,等. 鱸細菌性類結節(jié)病的病原及血液病理研究[J].水產(chǎn)學報, 2004,(06).703-

26、708</p><p>　　[8]金珊,王國良,趙青松,等.加州鱸白云病的病原及血液病理的初步研究[J].水生生物學報, 2005,(02).184-188</p><p>　　[9]李懋,黃二春,魏于生,等.淡水鯧六項血液指標的測定及血細胞結構的顯微觀察[J].淡水漁業(yè),1992,(3):20-23.</p><p>　　[10]林光華.鯉魚血液的研究[J]. 動

27、物學報, 1979,(09):210-219</p><p>　　[11]米瑞芙,陶煩春,王曉梅,等. 鰱敗血癥血液生理指標的變化[J]. 淡水漁業(yè),1993,23(4):16-19.</p><p>　　[12]米瑞芙.草魚、鯉和鰱血液學指標的測定[J] . 淡水漁業(yè),1982(4):10-16.</p><p>　　[13]梅廣海,朱永生, 曹格,等. 越冬羅非

28、魚細菌性類結節(jié)病的初步研究[J].水產(chǎn)科學,2002 ,21(4):9-11.</p><p>　　[14]龐啟華,黃文芳,謝鳳. 豐產(chǎn)鯽細菌性敗血癥的血液病理變化[J]. 應用與環(huán)境生物學報,2004.10(3):315-317</p><p>　　[15]宋曉玲,楊旭彤, 偲翰文,等.雙歧桿菌細胞壁肽聚糖的分離及其對兩種海產(chǎn)動物免疫活性的影響[J].水產(chǎn)學報.2005,29 (3):3

29、50-353.</p><p>　　[16]聞玉梅,陸德源. 現(xiàn)代微生物學. 第2版,上海:上海醫(yī)科大學出版社, 1992:1-2</p><p>　　[17]邢維賢,安利國,傅榮恕.鯉魚豎鱗病的血液病理學研究.山東師大學報(自然科學版).1996 .12:84-86</p><p>　　[18]余毅,吳寶華.白鰱瘋狂病血液的研究[A].中國水產(chǎn)學會第四次全國會員代

30、表大會暨學術年會論文集[C].1988,200- 203.</p><p>　　[19]袁思平, 王國良, 金珊. 養(yǎng)殖魚類致病諾卡氏菌研究進展[J]. 微生物學通報, 2006,(02):137-141</p><p>　　[20]周玉,郭文場,楊振國,等. 魚類血液指標研究的進展[J] . 上海水產(chǎn)大學學報, 2001,10(2):163 -165.</p><p&

31、gt;　　[21]周玉,郭文場,楊振國,等.歐洲鰻鱺”狂游病”血液生化指標研究[J].水生生物學報, 2002,26(3):314-316.</p><p>　　[22]Takashi S. ,Fukami S. , Shigeo Namioka. Ehanced resistance of mice to Escheriehia coli infection induced by administration

32、of Peptidoglycan derived from Bidoaoteriun thermo phylum[J]. Vet . Medical Sci . , 1994.56 :433</p><p>　　[23]Itami T. , Kondo M. Uozu M.et al.Enhancement of disease resistance against Enterococcus seriolicid

33、a infection in yellowtail Seriola quinqueradiata Temminck and Schlegel by oral administration of Peptidoglycan derived from Bifidobacterium thermophilum[J]. J . Fish Dis . 1996.19:185-187</p><p>　　[24]Itami

34、T , Masaya A. Enhancement of disease resistance of kuruma shrimp ,penaeus japonicus after oral administration of peptidoglican derived from Bif idobacterium thermophilum[J]. Aquacuture。1998. 164:277-288</p><p&

35、gt;　　[25]Sitdhi B ,Mali B. Effects of peptidoglycan ( PG) on growth , survival , Immune response and tolerance to stress in black tiger shrimp , Penaeus monodon[J]. Diseases in Asian Aquaculture II.1995.469-477</p>

36、<p><b>　　畢業(yè)論文文獻綜述</b></p><p><b>　　水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p>　　魚類血液指標的主要功能及研究概況</p><p>　　摘要：血液是具有活體組織所固有特性的一種結締組織，承擔著體內(nèi)運輸、防御、免疫、體液調(diào)節(jié)及維持內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定的功能。當魚體受到病菌感染而引起疾病并

37、發(fā)生生理或病理變化時, 必定會引起其血液生理生化指標的變化。本文綜述了魚類的主要血液指標、功能及疾病、免疫增強劑等因素對魚類血液指標的影響，以期為魚類疾病致病機理及免疫防病的研究提供理論參考。</p><p>　　關鍵詞：魚類；血液指標；疾??；免疫增強劑</p><p>　　血液是具有活體組織所固有特性的一種結締組織，承擔著體內(nèi)運輸、防御、免疫、體液調(diào)節(jié)及維持內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定的功能。其主要的

38、成分為血漿、血細胞。血液中含有各種營養(yǎng)成分，如無機鹽、氧、以及細胞代謝產(chǎn)物、激素、酶和抗體等，有營養(yǎng)組織、調(diào)節(jié)器官活動和防御有害物質的作用[1]。一般情況下，血液的調(diào)節(jié)能力是不強的，有時它的組成和結構也會發(fā)生相應的變化，而這種變化通常是病理性的。當魚體受到病菌感染而引起疾病并發(fā)生生理或病理變化時，必定與其血液生理生化指標變化有密切的關系[2]。因此，動物血液的各項生理生化指標被廣泛應用于評價魚類的健康與否、營養(yǎng)狀況及對環(huán)境的適應程度。&

39、lt;/p><p>　　1 魚類血液的主要生理生化指標及其功能</p><p>　　1.1 魚類血液的主要生理指標及其功能</p><p>　　魚類血液生理指標主要有紅細胞數(shù)RBC、白細胞數(shù)WBC、血紅蛋白Hb、紅細胞比容HCT、紅細胞沉降率ESR、紅細胞脆性EOB等。紅細胞也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細胞，同時也是脊椎動物體內(nèi)通過血液運送氧氣的最主要的媒介。血

40、紅蛋白是脊椎動物紅血細胞的一種含鐵的復合變構蛋白，由血紅素和珠蛋白結合而成，其功能是運輸氧和二氧化碳，維持血液酸堿平衡。紅細胞數(shù)量、血紅蛋白含量是與機體呼吸和供氧狀況緊密有關的指標[3]，當魚體受到病菌感染后，其正常生理活動發(fā)生紊亂，其紅細胞數(shù)量、血紅蛋白含量、紅細胞比容等都會發(fā)生明顯的變化。魚類白細胞數(shù)量及形態(tài)變化，也在一定程度上反映其造血機能及疾病的情況。當病原人侵機體時，刺激造血機能和體液防御機能相對增強，白細胞數(shù)相對增加，其中的

41、顆粒細胞和單核細胞增加明顯。而當疾病進人后期，魚體造血機能和體液防御機能就會相應減弱，此時的白細胞數(shù)量也隨之減少，并呈老化現(xiàn)象。紅細胞沉降率是指紅細胞在一定條件下的沉降速度。一般情況下，健康機體的血沉數(shù)值波動于一個較狹窄范圍內(nèi)，但在許多病理情況下，血沉就會明顯下降。紅細胞脆性是指引起紅細胞全部溶血的NaCl濃度，一般而言，新生紅細</p><p>　　1.2 魚類血液的主要生化指標及其功能</p>

42、<p>　　魚類血液生化指標主要有谷丙轉氨酶ALT、谷草轉氨酶AST、乳酸脫氫酶LDH、總蛋白TP、尿素BUN、肌酐Cr、總膽固醇CHO、血糖GLU，溶菌酶活性以及K+、Na+、Cl-等。谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、乳酸脫氫酶等血清酶類主要分布于機體的肝、腎、肌肉等組織細胞中，在正常情況下血清中這些酶活性低且相對恒定，并參與和控制機體內(nèi)糖、蛋白質和脂肪等物質的代謝。當魚感染疾病后，血清中這些酶類的活性就會大大增強，預示機體的肝、腎

43、、肌肉等主要器官組織細胞發(fā)生病變，細胞內(nèi)酶釋出。總蛋白即血清總蛋白，是血清固體成分中含量最多的物質，主要是由肝臟合成的；總膽固醇是指血液中所有脂蛋白所含膽固醇之總和，包括游離膽固醇和膽固醇酯，肝臟也是其合成和貯存的主要器官；而血糖在血清中的含量也與肝臟密切相關。因此，總蛋白、總膽固醇和血糖都是反映肝臟功能的重要指標。Marja等[5]研究表明，在一定程度上，血漿中溶菌酶活性變化與循環(huán)系統(tǒng)中白細胞數(shù)目變化相一致，白細胞數(shù)目多，溶菌酶活性就

44、增加，兩者正相關。尿素、肌酐、K+、Na+、Cl-等的含量則是腎功能的參考指標[3,6,7]。腎功能的衰竭，腎單位濾過與重吸收功能的失調(diào)會引起</p><p>　　2 疾病對魚類血液指標的影響 </p><p>　　國內(nèi)外學者對魚類血液學的研究做了很多工作。眾多的研究資料表明，魚類的血液學指標值與魚的種類、生活環(huán)境、營養(yǎng)、性別、健康狀況、疾病種類等有關[2,3,8]。如一些學者觀察到饑餓時

45、魚類血液中紅細胞數(shù)量會減少[9-11]，林光華[9]曾報道饑餓時紅細胞大小的變化，許多學者都發(fā)現(xiàn)魚類紅細胞數(shù)隨季節(jié)變化明顯等[12-14]。余毅[15]及米瑞芙[16]等的研究表明，患瘋狂病的鰱其TP和UGLU明顯降低，而患敗血癥鰱其TP、ALB明顯降低，BUN、肌酸酐(CREA)、P、谷草轉氨酶(GOT)等顯著升高，球蛋白(GLB)、GPT、甘油三酯(TG)、AChE的差異不顯著；患敗血癥和狂游癥的鰱白細胞數(shù)目都明顯增多，血漿中K、C

46、l離子也均明顯增高。陳福華等[17]關于赤點石斑魚增生性腎臟病的研究認為，當病原人侵魚體時，刺激造血機能和體液防御機能相對增強，白細胞數(shù)會相對增加；而當疾病進入后期，造血機能和體液防御機能也相應減弱，此時的白細胞數(shù)量會隨之減少。朱心玲等[18]研究患出血病的草魚表明，白蛋白和膽固醇的變化在潛伏期和發(fā)展期并不相同，白蛋白在潛伏期為顯著的增加，而在發(fā)展期為明顯的降低；膽固醇在潛伏期無變</p><p>　　3 免疫增

47、強劑對魚類血液指標的影響 </p><p>　　免疫增強劑，是一類通過不同方式達到增強機體免疫力的免疫治療藥物，如增強吞噬細胞的功能、提高細胞免疫或促進體液免疫功能等。免疫增強劑按其作用分為免疫佐劑、免疫恢復劑和免疫替代劑[23]。國內(nèi)外關于魚類免疫增強劑的研究報道很多，目前研究報道過的免疫增強劑主要有:左旋咪唑、FK-565、MDP、β-葡聚糖、肽聚糖，脂多糖、寡糖、甲殼質、甲殼胺、VC以及VE等[24]。研究

48、表明，免疫增強劑能引起魚類血液指標的變化，通過作用于魚體非特異性免疫因子來提高魚類的抗病力。如劉云等[25]報道了免疫增強劑（甲殼胺）能提高血液中白細胞數(shù)量和吞噬能力，增強鯽魚血清中酚氧化酶的活性，且對鯽魚的生長無明顯影響。鄧時銘等[26]證實了蛭弧菌微生態(tài)制劑在鯽魚體內(nèi)主要對頭腎產(chǎn)生顯著作用，能提高鯽魚的非特異性免疫。劉勇等[27]研究發(fā)現(xiàn)免疫增強劑可使河鯽魚血液中白細胞吞噬活性、血清和體液粘液的溶菌酶活性顯著提高。陳昌福等[28]研

49、究表明,在飼料中添加適量的免疫多糖(酵母細胞壁) 能夠增強異育銀鯽非特異性免疫功能，試驗組異育銀鯽白細胞吞噬活性均顯著高于對照組。</p><p><b>　　4 展望</b></p><p>　　隨著集約化養(yǎng)殖技術的應用，養(yǎng)殖規(guī)模突飛猛進，然而制約養(yǎng)殖生產(chǎn)的問題也日益突出。水環(huán)境污染、高密度養(yǎng)殖等不可避免地影響?zhàn)B殖魚類的健康，使其感染疾病的機率大大提高，導致養(yǎng)殖病害

50、頻繁發(fā)生，造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前，通過提高水產(chǎn)動物免疫力來抵抗疾病的發(fā)生已成為研究熱點?？股丶盎瘜W藥品的使用會使魚類疾病的病原生物抗藥性增強，并對生態(tài)環(huán)境造成污染，因此，深入研究水產(chǎn)動物免疫機理以及通過使用合適的免疫增強劑來增強養(yǎng)殖魚類免疫防御力，將會是魚類病害防治研究的趨勢。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 陳曉耘.

51、魚類的血液[J].重慶師專學報,2000,19(3):70-73.</p><p>　　[2] 卓孝磊,梁日深,梁桂洪,等.月鱧、烏鱧和斑鱧血液指標、血細胞比較分析[J].科技導報2008,26(13):85-87.</p><p>　　[3] 周玉,郭文場,楊振國,等.魚類血液學指標研究的進展[J].上海水產(chǎn)大學學報,2001,10(2):163-165. </p>&

52、lt;p>　　[4] 金珊,王國良,趙青松,等.鱸細菌性類結節(jié)病的病原及血液病理研究[J].水產(chǎn)學報,2004,28(6):703-708.</p><p>　　[5] Marjam,Antti S. Changes in plasma lysozyme and blood leucocyte levels of hatchery - reared Atlantic Salmon and sea tro

53、ut during parr-smolt transformation[J]. Aquaculture,1992,106:75-87.</p><p>　　[6] 周玉,郭文場,楊振國,等.歐洲鰻鱺”狂游病”血液生化指標研究[J].水生生物學報,2002,26(3):314-316. </p><p>　　[7] 尾崎久雄.魚類血液與循環(huán)生理[M].上海:上?？茖W技術出版社,1982:

54、59,74-92,89.</p><p>　　[8] 袁仕取,張永安,姚衛(wèi)建,等. 鱖魚外周血細胞顯微和亞顯微結構的觀察[J].水生生物學報,1998,22(1):39-45.</p><p>　　[9] 林光華.鯉魚血液的研究[J].動物學報,1979,25(9):210-219</p><p>　　[10] 米瑞芙.草魚、鯉和鰱血液學指標的測定[J].淡水漁

55、業(yè),1982(4):10-16.</p><p>　　[11] 羅貫一.黃鱔血液的實驗.魚類學論文集(第三輯)[M].科學出版社.1983:69-75.</p><p>　　[12] 沈曉民,華苒.團頭魴九項血液學指標的正常值[J].動物學雜志,1990,25(1):3-6.</p><p>　　[13] 朱心玲,賈麗珠,張明瑛.草魚血液學的研究.I.九項血液常數(shù)的

56、周年變化[J].水生生物學報,1991,9(3):248-256.</p><p>　　[14] 林光華,張豐旺,翁世聰. 草魚血液的研究[J].動物學報,1985,31(4):336-343.</p><p>　　[15] 余毅,吳寶華.白鰱瘋狂病血液的研究[A].中國水產(chǎn)學會第四次全國會員代表大會暨學術年會論文集[C].1988,200-203.</p><p>

57、;　　[16] 米瑞芙,陶煩春,王曉梅,等.鰱敗血癥血液生理指標的變化[J].淡水漁業(yè),1993,23(4):16-19.</p><p>　　[17] 陳福華,陳畢生,楊鶯鶯,等.赤點石斑魚增生性腎臟病的血液病理觀察[J].熱帶海洋,1997,16(3):49-53.</p><p>　　[18] 朱心玲,賈麗珠,張明瑛.草魚出血病潛伏期和發(fā)展期的血液病理研究[J].水生生物學報,198

58、7,11(1):59-66.</p><p>　　[19] 張永嘉,吳澤陽,許其爵,等.網(wǎng)箱養(yǎng)殖羅非魚綜合癥的血清分析[J].水利漁業(yè),1994,(2):8,9,47.</p><p>　　[20] 陳寅兒,金珊,王國良.鱸魚溶藻弧菌病的血液生理生化指標研究[J].臺灣海峽, 2005,24(1):104-108.</p><p>　　[21] 邢維賢,安利國,傅榮

59、恕.鯉魚豎鱗病的血液病理學研究[J].山東師大學報(自然科學版),1996,11(4):84-86.</p><p>　　[22] 龐啟華,黃文芳,謝鳳.豐產(chǎn)鯽細菌性敗血癥的血液病理變化[J].應用與環(huán)境生物學報,2004,10(3):315-317.</p><p>　　[23] 謝少文.中國醫(yī)學百科全書-免疫學[M].上?？茖W技術出版社.1983:37-38.</p>&

60、lt;p>　　[24] Masahiro S.Current research status of fishi immunostimulants[J]. Aquaculture,1999,172:63-92.</p><p>　　[25] 劉云,孫峰,王丹.免疫增強劑對鯽魚非特異性免疫功能的影響[J].海洋科學,2004,28(9):42-45.</p><p>　　[26] 鄧時銘

61、,謬伏初,黃華偉,等.蛭弧菌微生態(tài)制劑對鯽非特異性免疫的影響[J].科學養(yǎng)魚,2009,(7):54-55.</p><p>　　[27] 劉勇,賈永紅.免疫增強劑對河鯽魚白細胞吞噬和溶菌酶活性的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學.2007,35(1):111-113.</p><p>　　[28] 陳昌福,吳凡,熊傳喜,等.免疫多糖(酵母細胞壁)對受免異育銀鯽免疫應答的調(diào)節(jié)作用[J].淡水漁業(yè),2

62、004,6(4):55-57.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設計</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物對烏鱧免疫活性的影響</p><p><b>　　目錄</b></p><p

63、><b>　　1引言16</b></p><p>　　2 材料與方法16</p><p><b>　　2.1材料17</b></p><p>　　2.1.1 實驗菌種17</p><p>　　2.1.2 實驗用魚17</p><p>　　2.1.3實驗用水1

64、7</p><p>　　2.1.4 藥品和試劑17</p><p>　　2.2 試驗方法17</p><p>　　2.2.1 溶壁微球菌懸液的制備17</p><p>　　2.2.2肽聚糖注射液的制備17</p><p>　　2.2.3注射實驗17</p><p>　　2.2.4 血清

65、、血細胞樣本的采集17</p><p>　　2.2.5血細胞脆性（EOB）的測定17</p><p>　　2.2.6血細胞計數(shù)（RBS）17</p><p>　　2.2.7溶菌酶活力的測定18</p><p>　　2.2.8血液生化指標的測定18</p><p>　　2.3數(shù)據(jù)分析18</p>

66、<p><b>　　3 結果18</b></p><p>　　3.1諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血液生理指標的影響18</p><p>　　3.1.1諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血細胞數(shù)量的影響18</p><p>　　3.1.2諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血細胞脆性的影響18</p><p>　　3.1.

67、3 諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧溶菌酶活力的影響19</p><p>　　3.2諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血液生化指標的影響19</p><p>　　3.2.1 血清總蛋白TP20</p><p>　　3.2.2 血清白蛋白ALB20</p><p>　　3.2.3 堿性磷酸酶ALP21</p><p>　　3

68、.2.4 尿素氮BUN21</p><p>　　3.2.5 乳酸脫氫酶LDH22</p><p>　　3.2.6 乳酸脫氫酶同工酶LDH122</p><p><b>　　4 討論23</b></p><p>　　4.1 免疫多糖對水產(chǎn)動物血細胞數(shù)量和血細胞脆性的影響23</p><p>

69、;　　4.2 免疫多糖對水產(chǎn)動物溶菌酶活力的影響23</p><p>　　4.3免疫多糖對水產(chǎn)動物血清總蛋白（TP）和血清白蛋白（ALB）的影響23</p><p>　　4.4 免疫多糖對水產(chǎn)動物堿性磷酸酶（ALP）的影響24</p><p>　　4.5 免疫多糖對水產(chǎn)動物尿素氮（BUN）的影響24</p><p>　　4.6免疫多糖

70、對水產(chǎn)動物乳酸脫氫酶（LDH）和乳酸脫氫酶同工酶（LDH1）的影響24</p><p>　　致謝錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻25</b></p><p>　　摘要：采用濃度為16.7mg/mL的鰤魚諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物對烏鱧進行腹腔注射，于實驗24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h時

71、取其血液測定血細胞數(shù)目、血細胞脆性（EOB）、溶菌酶活力（LSZ）、血清總蛋白（TP）含量、血清白蛋白(ALB)含量、堿性磷酸酶（ALP）活性、尿素氮（BUN）含量、乳酸脫氫酶（LDH）活性以及乳酸脫氫酶同工酶（LDH1）等與烏鱧免疫力相關的血液生理指標和生化指標，結果表明：鰤魚諾卡氏菌細胞壁肽聚糖使烏鱧血細胞數(shù)目和血細胞脆性均有增加，但影響不顯著（P>0.05）；溶菌酶活力、血清總蛋白和血清白蛋白在48h時顯著上升（P<0

72、.05）；堿性磷酸酶ALP活性與對照組相比，均呈現(xiàn)上升趨勢，且差異性顯著（P<0.05）；尿素氮水平顯著低于對照組（P<0.05），實驗96 h后保持相對穩(wěn)定；乳酸脫氫酶活性和乳酸脫氫酶同工酶均在72h時達到最強，與對照組差異顯著（P<0.05），說明鰤魚諾卡氏菌細胞壁肽聚糖能夠增強烏鱧的免疫活性。</p><p>　　關鍵詞：諾卡氏菌；肽聚糖；烏鱧；血液生理指標；血液生化指標</p>

73、;<p>　　Abstract:With 16.7g/mL of Yellowtail Nocardia cell wall peptidoglycan intraperitoneal injection for argus, at 24h, 48h, 72h, 96h, 120h, 144h, 168h after the experimental collect blood to determine the Red b

74、lood cell count, blood cell fragility(EOB), Lysozyme activity(LSZ), serum total protein (TP), serum albumin(ALB), alkaline phosphatase(ALP), blood urea nitrogen (BUN), lactate dehydrogenase (LDH), lactate dehydrogenase i

75、soenzyme (LDH1) and other physiological and biochemical indexes of blood r</p><p><b>　　朗讀</b></p><p>　　顯示對應的拉丁字符的拼音</p><p><b>　　字典</b></p><p>　　

76、Key words: Nocardia; peptidoglycan; Ophicephalus argus; blood physiological parameters; blood biochemical parameters</p><p><b>　　1引言</b></p><p>　　諾卡氏菌（Nocardia）為革蘭氏陽性菌，好氧，分類上屬細菌域，厚壁菌

77、門，放線菌綱，放線菌目，諾卡氏菌科。菌體呈長或短桿狀, 或細長分枝狀，常斷裂成桿狀至球狀體，基絲發(fā)達，呈分枝狀，氣絲較少。魚類諾卡氏菌病于1963年在全球首次報告，確認于阿根廷熱帶養(yǎng)殖的虹彩脂魚（Hyphessobrycon innesi）[1]。隨后此病又陸續(xù)發(fā)生在虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、黃尾鰤（Seriola lalandi）、烏鱧、大西洋牡蠣（Crassostrea gigas）、大口鱸（Micropter

78、us salmoides）和海鱸（Lateolabrax japonicus）等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中，曾影響日本、美國、澳大利亞、加拿大等地的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，造成很大經(jīng)濟損失[2]。該病曾是日本水產(chǎn)養(yǎng)殖中最主要的水產(chǎn)動物疾病之一，也是大西洋牡蠣養(yǎng)殖的主要疾病。而該病近年來對我國大陸和臺灣水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)也產(chǎn)生了較大影響，先后在烏鱧、大口鱸、海鱸、大黃魚等養(yǎng)殖魚類中發(fā)生此病[3]。</p><p>　　肽聚糖( peptidogl

79、ycan) 又稱粘肽、胞壁質或粘質復合物，由雙糖單位，四肽尾還有肽橋聚合而成，是N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰胞壁酸（NAMA）交替連接的雜多糖與不同組成的肽交叉連接形成的多層網(wǎng)狀大分子結構。其是一種多糖與氨基酸相連的多糖復合物，由于此復合物中氨基酸鏈不像蛋白質中的那樣長，故稱肽聚糖。肽聚糖是許多細菌細胞壁的主要成分，不同的肽聚糖中出現(xiàn)的氨基酸數(shù)是有限的，亞肽單位及間肽橋上氨基酸的組成及排列上的不同，決定了肽聚糖種類的多樣性[4]

80、。近年來的大量的研究結果表明，肽聚糖具有包括佐劑活性在內(nèi)的多種生物活性。肽聚糖能對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生不同的免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強機體免疫能力，是一種免疫系統(tǒng)的免疫增強劑。肽聚糖能夠刺激B、T 淋巴細胞，增強體液免疫和細胞免疫，激活單核細胞及多核白細胞的吞噬活性，活化補體[5]，其分子中的多糖成分還具有抗腫瘤，抗感染能力[6]。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中投喂肽聚糖后發(fā)現(xiàn)，其能顯著提高水產(chǎn)動物如五條鰤[7]、斑節(jié)對蝦[8]、日本對蝦[9]等抗病力和成活率。因此

81、，使用肽聚糖有利于解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中大量使用抗生素藥物防治病害所表現(xiàn)出的生物抗藥性問題及食品的藥</p><p>　　烏鱧（Ophicephalus argus），亦稱黑魚，屬鱸形目，攀鱸亞目，鱧科，鱧屬，體呈烏黑色，細長，前部圓筒狀，后部側扁，由背至腹顏色逐漸變淺，圓鱗。烏鱧分布極為廣泛，除西部高原地區(qū)外，從黑龍江至海南的河川、湖泊、水庫、池塘等各種類型的水體中均有發(fā)現(xiàn)，國外產(chǎn)于朝鮮西、南部。烏鱧肉質鮮美，富含蛋白

82、質、脂肪、18種氨基酸等，還含有人體必需的鈣、磷、鐵及多種維生素，營養(yǎng)豐富、肉味甘性溫且骨刺少，有補脾、利水的藥用功能，深受群眾的歡迎。烏鱧是一種適應性強、對不良水溫、水質及缺氧條件有較強耐受力的魚類，在江河湖塘等自然環(huán)境中很少發(fā)病。但隨著烏鱧人工高密度養(yǎng)殖的發(fā)展，由于養(yǎng)殖密度過高，養(yǎng)殖區(qū)域水質惡化嚴重，以及烏鱧經(jīng)過多代人工繁育造成種質退化，導致機體抵抗力下降等原因，烏鱧的病害時有發(fā)生，且呈現(xiàn)出種類多、流行范圍廣、防治效果不明顯等特點，

83、給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了較大的經(jīng)濟損失，也對烏鱧養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展起著嚴重的阻礙作用。</p><p>　　本實驗以烏鱧為研究對象，通過對烏鱧人工注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物，研究其對烏鱧免疫活性指標的影響，為烏鱧諾卡氏菌病的防治提供理論參考。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p><b>　　2.1材料<

84、/b></p><p>　　2.1.1 實驗菌種 </p><p>　　鰤魚諾卡氏菌（Nacardia seriolea）、溶壁微球菌（Microcrococcus lysodeikticus）。</p><p>　　2.1.2 實驗用魚</p><p>　　烏鱧（O.argus )購自寧波水產(chǎn)市場，體重400~500g，體長約30cm

85、，共40尾。經(jīng)高錳酸鉀全身消毒后，分成2組，分別為實驗組和對照組。暫養(yǎng)于室內(nèi)大塑料桶中并用遮陽布遮蓋，以保持適宜的環(huán)境暗度。根據(jù)水質情況每天適時換水1~2次，每次換水1/3。定時定量投喂小魚，及時吸出殘餌和糞便，保持水質的清潔。</p><p>　　2.1.3實驗用水 </p><p>　　實驗用水為充分曝氣處理的自來水，試驗期間使用充氧泵持續(xù)充氧。</p><p>

86、;　　2.1.4 藥品和試劑 </p><p>　　血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、乳酸脫氫酶（LDH）、乳酸脫氫酶同工酶（LDH1）等試劑盒購自美康生物科技有限公司；0.067mol/L磷酸緩沖液（KH2PO4 73mL，0.067mol/L K2HPO4 27mL，NaCl 0.5g，pH 6.4）；0.75%的生理鹽水；鰤魚諾卡氏菌肽聚糖（本研究室自制）。

87、</p><p><b>　　2.2 試驗方法</b></p><p>　　2.2.1 溶壁微球菌懸液的制備 </p><p>　　將溶壁微球菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面上，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用0.067mol/L PBS（pH 6.4）將溶壁微球菌從營養(yǎng)瓊脂斜面上洗下，配成0.2mg/mL的菌懸液（在570nm處的吸光值為A=0.4

88、00），備用。</p><p>　　2.2.2肽聚糖注射液的制備 </p><p>　　取鰤魚諾卡氏菌細胞壁肽聚糖粗提物0.25g溶于15ml的0.75%生理鹽水中，制成濃度為0.0167g/mL的肽聚糖注射液。</p><p>　　2.2.3注射實驗 </p><p>　　采用腹部注射的方法將已配好的肽聚糖溶液注射到實驗組魚體內(nèi)，每尾

89、注射0.5ml，對照組注射同量無菌生理鹽水。注射后分別在24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h時每組取魚3尾，抽取其血液樣本，用以各項血液指標的檢測。</p><p>　　2.2.4 血清、血細胞樣本的采集 </p><p>　　將烏鱧側放平躺于解剖盤中，尾部穿刺靜脈采血后，一部分放置于離心管中4℃靜置過夜，經(jīng)3000r/min離心后吸出血清，用于溶菌酶活力和各項

90、生化指標的測定；另一部分用無菌肝素鈉抗凝，用于血細胞計數(shù)以及血細胞脆性的測定，當天完成。</p><p>　　2.2.5血細胞脆性（EOB）的測定</p><p>　　配置系列濃度為0.17%~0.45%（梯度為0.02%）的NaCl溶液放入若干支試管中并編號，取血后立即向各試管中滴入一滴血并揉搓混勻，室溫下放置2小時后觀察結果，以完全溶血的NaCl濃度作為紅細胞最大抵抗值，即紅細胞的最小

91、脆性。</p><p>　　2.2.6血細胞計數(shù)（RBS）</p><p>　　按Neubuer氏改良方法進行。用5mL移液槍準確吸取3.98mL紅細胞稀釋液于干凈試管內(nèi)，然后用毛細吸管吸20μl血放入試管底部，輕輕搖振試管1~2min，以混勻稀釋的血液，然后用血球計數(shù)板進行計數(shù)。</p><p>　　2.2.7溶菌酶活力的測定</p><p&g

92、t;　　根據(jù)簡紀常[10]的方法進行。吸取40uL血清加入到3mL溶壁微球菌菌懸液中，均勻混合后立刻在540nm下測定A0值；然后在28℃水浴中溫浴30min，取出后置于4℃冰浴中以終止反應，再測定A值；最后按公式計算溶菌酶活力：U=(A0-A)/A。</p><p>　　2.2.8血液生化指標的測定 </p><p>　　血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）

93、、尿素氮（BUN）、乳酸脫氫酶（LDH）、乳酸脫氫酶同工酶1（LDH1）等的測定均在日立7020全自動生化儀上完成，具體方法根據(jù)說明書進行。</p><p><b>　　2.3數(shù)據(jù)分析</b></p><p>　　所得結果均以3個平行組數(shù)據(jù)的平均值±標準差(Means±SE)表示；所有數(shù)據(jù)分析均采用SPSS 13.0 (Statiscal Pack

94、age for the Social Science) 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-factor analysis of variance)和均值多重比較分析(LSD法)。</p><p><b>　　3 結果</b></p><p>　　3.1諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血液生理指標的影響</p><p>　　3.1.1諾卡氏菌細胞壁肽

95、聚糖對烏鱧血細胞數(shù)量的影響</p><p>　　烏鱧注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后血細胞數(shù)目的變化情況見圖1。由圖1可知，烏鱧在注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后，實驗144h內(nèi)各實驗組血細胞數(shù)量與對照組相比都有增加，但均不存在顯著性差異（P>0.05）。</p><p>　　圖1肽聚糖對烏鱧血細胞數(shù)量的影響</p><p>　　Fig.1 Effects of pep

96、tidoglycan on the Red blood cell count of Ophicephalus argus</p><p>　　3.1.2諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血細胞脆性的影響</p><p>　　烏鱧注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后血細胞脆性的測定結果見圖2。由圖2可知，在實驗48h后實驗組烏鱧血細胞脆性比對照組均略有增大，但差異不顯著（P>0.05）。</p&g

97、t;<p>　　圖2 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血細胞脆性的影響</p><p>　　Fig.2 Effects of peptidoglycan on the blood cell fragility of Ophicephalus argus</p><p>　　3.1.3 諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧溶菌酶活力的影響</p><p>　　注射

98、諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后，烏鱧血液溶菌酶活力的變化情況見圖3。由圖3可知，實驗48h時實驗組溶菌酶活力與對照組相比有顯著增強（P<0.05）；其它實驗時間點差異不顯著（P>0.05）。</p><p>　　圖3 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧溶菌酶活力的影響</p><p>　　Fig.3 Effects of peptidoglycan on the Lysozyme act

99、ivity of Ophicephalus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）</p><p>　　3.2諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血液生化指標的影響</p><p>　　3.2.1 血清總蛋白TP</p><p>　　圖4為烏鱧注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后血清總蛋白TP的變化情況。由圖4可

100、知，在實驗48h內(nèi)，實驗組烏鱧血清總蛋白含量迅速增高并顯著高于對照組（P<0.05），但其后逐漸降低，與對照組差異不顯著（P>0.05）。</p><p>　　圖4 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血清總蛋白TP的影響</p><p>　　Fig.4 Effects of peptidoglycan on the serum total protein of Ophicepha

101、lus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）</p><p>　　3.2.2 血清白蛋白ALB</p><p>　　注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后，烏鱧血液血清白蛋白ALB的變化情況見圖5。由圖5可知，烏鱧在注射肽聚糖后，其血清白蛋白含量有增高趨勢，實驗48h時顯著大于對照組（P<0.05），但其它實驗時間點差異

102、性不顯著（P>0.05）。</p><p>　　圖5 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧血清白蛋白ALB的影響</p><p>　　Fig.5 Effects of peptidoglycan on the serum albumin of Ophicephalus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P>0.05）<

103、/p><p>　　3.2.3 堿性磷酸酶ALP</p><p>　　注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧堿性磷酸酶ALP活性的影響見圖6。由圖6可知，在實驗時間內(nèi)各實驗組堿性磷酸酶ALP活性與對照組相比，均呈現(xiàn)上升趨勢。在實驗24h時，實驗組堿性磷酸酶活性最大，實驗24h、48h、96h、144h、168h時實驗組與對照組差異顯著（P<0.05）。</p><p>　　

104、圖6 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧堿性磷酸酶ALP活性的影響</p><p>　　Fig.6 Effects of peptidoglycan on the alkaline phosphatase of Ophicephalus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）</p><p>　　3.2.4 尿素氮BU

105、N</p><p>　　圖7為烏鱧注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后尿素氮BUN含量的變化情況。由圖7可知，隨著實驗時間的延長，實驗組烏鱧尿素氮水平逐漸低于對照組，實驗96h后保持相對穩(wěn)定，且均顯著低于對照組（P<0.05）。</p><p>　　圖7 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧尿素氮BUN的影響</p><p>　　Fig.7 Effects of pepti

106、doglycan on the blood urea nitrogen of Ophicephalus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）</p><p>　　3.2.5 乳酸脫氫酶LDH</p><p>　　注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧乳酸脫氫酶LDH活性的影響見圖8。由圖8可知，在實驗72h內(nèi)烏鱧血液乳酸脫

107、氫酶活性逐漸增強，72h時達到最強，與對照組差異顯著（P<0.05）；其后逐漸降低，并一直處于對照組水平附近，差異不顯著（P>0.05）。</p><p>　　圖8 注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖對烏鱧乳酸脫氫酶LDH的影響</p><p>　　Fig.8 Effects of peptidoglycan on the lactate dehydrogenase of Ophice

108、phalus argus</p><p>　　*表示實驗組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）</p><p>　　3.2.6 乳酸脫氫酶同工酶LDH1</p><p>　　圖9為注射諾卡氏菌細胞壁肽聚糖后對烏鱧乳酸脫氫酶同工酶1LDH1活性的影響。由圖9可知，在72h時實驗組烏鱧血液乳酸脫氫酶同工酶活性最強，與對照組差異顯著（P<0.05）；其它實驗