酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)羅氏沼蝦免疫相關(guān)同工酶的影響.pdf

1、我國(guó)在水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)中占據(jù)著舉足輕重的作用,就2003年的海水養(yǎng)殖蝦總產(chǎn)量就已達(dá)到了全球總量的31％。但由于集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,養(yǎng)殖規(guī)模的盲目擴(kuò)大和養(yǎng)殖水域的過(guò)度開(kāi)發(fā),破壞了水體生態(tài)平衡,引起病原菌的大量繁殖給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此采取何種有效的方法來(lái)預(yù)防控制這些疾病已成為熱點(diǎn)問(wèn)題。近幾年來(lái)免疫多糖類(lèi)免疫促進(jìn)劑的研究及應(yīng)用備受學(xué)者們的關(guān)注,而酵母細(xì)胞壁多糖已經(jīng)被證明是一種良好的免疫促進(jìn)劑,它不僅能夠加快蝦蟹免疫器官的發(fā)育,又能激發(fā)

2、機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)。因此關(guān)于酵母細(xì)胞壁多糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)際應(yīng)用中的給藥方法、適宜使用量及處理時(shí)間都是目前研究的熱點(diǎn)。本研究課題采用浸浴和注射兩種給藥方法,分析比較酵母細(xì)胞壁多糖在不同濃度和不同時(shí)間對(duì)羅氏沼蝦體內(nèi)心臟、肝臟、鰓和肌肉4種組織中酸性磷酸酶(ACP)、過(guò)氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)等4種免疫相關(guān)同工酶的作用,以進(jìn)一步探討這種免疫促進(jìn)劑對(duì)羅氏沼蝦體內(nèi)免疫系統(tǒng)的作用機(jī)理,并為酵母細(xì)胞壁多糖在蝦

3、類(lèi)等水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用提供參考。
　　 ⑴不同濃度酵母細(xì)胞壁多糖浸浴對(duì)羅氏沼蝦免疫相關(guān)同工酶的影響。將酵母細(xì)胞壁多糖配制成0.00mg／L、31.25 mg／L、62.50mg／L、125.00mg／L,和250.00mg／L5個(gè)濃度,對(duì)羅氏沼蝦進(jìn)行浸浴處理120h后,通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及酶活力測(cè)定方法來(lái)探討酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)羅氏沼蝦心臟、肝臟、鰓和肌肉4種組織中幾種免疫相關(guān)同工酶(酸性磷酸酶(ACP),過(guò)氧化物酶(

4、POD),多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD))的影響。結(jié)果如下:ACP、POD、PPO和SOD4種免疫相關(guān)酶在所取得的4種組織中均有分布,且不同組織各種酶的表達(dá)不同,具有很明顯的組織特異性。經(jīng)不同濃度的酵母細(xì)胞壁多糖浸浴處理后,羅氏沼蝦4種組織中的ACP等4種同工酶酶譜變化主要表現(xiàn)在酶帶顏色深淺上,無(wú)酶帶的新增和缺失現(xiàn)象,各組織中的各同工酶酶帶數(shù)保持不變。并且不同濃度的酵母細(xì)胞壁多糖浸浴處理明顯提高了羅氏沼蝦體內(nèi)鰓、肝臟和心

5、臟組織中的ACP酶活力,鰓中的POD和PPO酶活力,心臟和鰓中的SOD酶活力,除鰓中的SOD酶活力在62.50mg／L濃度浸浴時(shí)增強(qiáng)作用最顯著外,其余均在125.00mg／L濃度浸浴時(shí)增強(qiáng)作用最顯著。因此,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明浸浴酵母細(xì)胞壁多糖能明顯提高羅氏沼蝦體內(nèi)的免疫功能,尤其對(duì)鰓中的4種免疫相關(guān)酶的增強(qiáng)作用最明顯,且在酵母細(xì)胞壁多糖濃度為125.00mg／L效果最佳。
　　 ⑵酵母細(xì)胞壁多糖浸浴不同時(shí)間對(duì)羅氏沼蝦免疫相關(guān)同工酶的

6、影響。利用上述實(shí)驗(yàn)確定的最佳濃度(125.00 mg／L)酵母細(xì)胞壁多糖作為免疫激活劑對(duì)羅氏沼蝦進(jìn)行浸浴處理,分別在0h、48h、96h、144h和196h取蝦體心臟、肝臟、鰓和肌肉組織,測(cè)定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并結(jié)合聚丙烯酰胺凝膠電泳酶譜分析發(fā)現(xiàn),經(jīng)酵母細(xì)胞壁多糖浸浴不同時(shí)間后,羅氏沼蝦4種組織中的POD、PPO和SOD同工酶圖譜變化主要表現(xiàn)在酶帶顏色深淺上,而ACP酶譜不但在顏色上有一定的變化,在浸浴時(shí)間達(dá)到144

7、h后,心臟和肝臟組織中均新增了一條ACP-4酶帶。酶活力測(cè)定結(jié)果與酶譜結(jié)果相一致,并且都顯示在浸浴時(shí)間達(dá)144h后,各組織中的ACP活力,鰓和肝臟中POD活力以及心臟組織中的SOD活力均達(dá)到酶活力峰值,與相應(yīng)對(duì)照組具有顯著性差異。鰓和肝臟中PPO雖在浸浴96h后達(dá)到酶活力峰值,但在144h時(shí)酶活力仍維持較高水平,差異依然顯著。因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,對(duì)羅氏沼蝦浸浴酵母細(xì)胞壁多糖的有效作用時(shí)間為96h至144h。
　　 ⑶不同濃度酵母

8、細(xì)胞壁多糖注射對(duì)羅氏沼蝦免疫相關(guān)同工酶的影響。對(duì)羅氏沼蝦注射不同濃度(0.0％、1.0％、2.0％和3.0％)的酵母細(xì)胞壁多糖溶液0.1ml／尾,72h后取蝦心臟、肝臟、鰓和肌肉組織,測(cè)定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并結(jié)合電泳酶譜來(lái)分析研究注射酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)羅氏沼蝦免疫系統(tǒng)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在注射濃度為2.0％時(shí),4種免疫酶活力均有明顯提高,酶帶顏色明顯加深或變寬,尤其在肌肉組織中的變化最顯著,表現(xiàn)為其ACP、PPO和SOD

9、活力均達(dá)到峰值,分別為38.995 U／L、0.532U和12.297U／mg,且都與相應(yīng)對(duì)照組差異顯著。心臟組織中的ACP活力和肝臟組織中的POD活力也達(dá)到酶活力峰值,分別為89.131 U／L和22.517 Eu／(g.min),也均顯著高于對(duì)照組。由此表明,采用2.0％的酵母細(xì)胞壁多糖對(duì)羅氏沼蝦進(jìn)行腹腔注射處理效果最佳。
　　 ⑷注射酵母細(xì)胞壁多糖不同時(shí)間后對(duì)羅氏沼蝦免疫相關(guān)同工酶的影響。利用上述最佳注射濃度(2.0％)的

10、酵母細(xì)胞壁多糖作為免疫激活劑對(duì)羅氏沼蝦進(jìn)行腹腔注射處理,分別在24h,48h,72h,96h和120h取肝臟、心臟和肌肉組織,測(cè)定其ACP和POD的活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),心臟和肌肉組織中的ACP活力均在72h后顯著提高且均達(dá)到峰值,分別為93.0U／L和34.5 U／L。而肝臟組織中的ACP活力在96h才有明顯提高,達(dá)到峰值284U／L。3種組織中的ACP活力自從上升后均一直維持較高水平,直到120h后依然顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。由過(guò)

11、氧化物酶(POD)活性測(cè)定數(shù)據(jù)顯示,經(jīng)注射酵母細(xì)胞壁多糖后,沼蝦心臟和肝臟中的POD活力分別于72h和48h后顯著提高且達(dá)到峰值,分別為5.38 Eu／(g.min)和23.16 Eu／(g.min),均顯著高于對(duì)照組水平(P<0.05),且兩種組織中的POD活力上升后均維持了24h,分別于96h和72h仍然顯著高于對(duì)照組。肌肉組織中的POD酶活力雖有提高但變化不明顯。總之,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明酵母細(xì)胞壁多糖可以激活沼蝦的免疫系統(tǒng),增強(qiáng)其抵抗病

12、毒的能力,并且對(duì)沼蝦注射酵母細(xì)胞壁多糖48h后就可以起到明顯的免疫增強(qiáng)作用,且可維持至120h。
　　 綜上所述,采用浸浴和注射的方法均能誘導(dǎo)羅氏沼蝦的體液免疫反應(yīng),提高各種免疫酶活力,從而增強(qiáng)蝦體防病抗病能力。浸浴的給藥方法對(duì)蝦體的作用比較溫和但見(jiàn)效較慢,本實(shí)驗(yàn)用125.00mg／L的酵母細(xì)胞壁多糖浸浴羅氏沼蝦96h后才有明顯的免疫增強(qiáng)效果,144h時(shí)增強(qiáng)效果最佳；而注射的給藥方法對(duì)蝦體的刺激較大但是作用見(jiàn)效相對(duì)較快,本實(shí)驗(yàn)用