霉菌細胞壁β-葡聚糖對潰瘍性結腸炎腸道粘膜免疫的影響.pdf

1、背景：腸道菌群多態(tài)性改變是炎癥性腸?。↖BD）的發(fā)病機制之一，腸道中含有的共生霉菌可能參與IBD的發(fā)生發(fā)展，其中霉菌的主要識別受體Dectin-1可誘導固有免疫及適應性免疫反應，參與腸道的抗菌作用。腸道上皮細胞（IECs）發(fā)揮著重要的免疫屏障功能維持腸道穩(wěn)態(tài)。然而，尚缺乏三者在潰瘍性結腸炎中的作用及機制研究。
　　第一部分霉菌細胞壁成分β-葡聚糖對小鼠腸炎的影響
　　目的：研究霉菌細胞壁成分β-葡聚糖對腸炎小鼠模型腸道組織炎

2、癥的影響、相關炎癥因子表達情況及調控機制。方法：采用dnTGFβRII腸炎小鼠模型及野生型小鼠給予β-葡聚糖灌胃給藥，通過蘇木精-伊紅染色法對小鼠腸道組織進行病理評分；通過免疫組織化學及Western blot方法，檢測腸道組織中相關炎癥因子的表達情況。結果：1. dnTGFβRII腸炎小鼠模型中，給藥組小鼠體重較對照組減輕明顯（*P＜0.05，**P＜0.01），野生型小鼠則表現為體重增長緩慢（*P＜0.05）；2.在dnTGFβRI

3、I腸炎小鼠模型中，給藥組小鼠腸道炎癥評分及相關炎癥因子表達顯著高于對照組(*P＜0.05)；在野生型小鼠中，給藥組小鼠腸道炎癥評分及相關炎癥因子表達與對照組小鼠相比無明顯差異；3.在dnTGFβRII腸炎小鼠模型中，處理組小鼠腸道組織中IL-23p19表達量明顯增（**P＜0.01）。結論：霉菌細胞壁成分β-葡聚糖可加重dnTGFβRII腸炎小鼠模型中腸道炎癥及相關炎癥因子的表達，而對野生型小鼠腸道炎癥無明顯影響，提示其在IBD發(fā)病機制

4、中可能發(fā)揮的重要作用。
　　第二部分β-葡聚糖通過C型凝集素受體Dectin-1誘導結腸上皮內的炎癥
　　目的：探討β-葡聚糖對結腸上皮內炎癥的影響及其受體Dectin-1在此過程中的調控機制。方法：用β-葡聚糖小分子微粒酵母聚糖（zymosan）處理人結腸上皮細胞HT29和Caco2細胞株，以Western blot檢測相關因子IL-23p19的表達水平，以及zymosan對結腸上皮中NF-κB途徑蛋白激酶磷酸化的影響。N

5、F-κB特異性抑制劑（MD0354）和Dectin-1受體競爭性抑制劑（Laminarin）預處理后對腸上皮細胞內相關炎癥因子的表達及NF-κB途徑蛋白激酶磷酸化的影響。結果：1. Zymosan可通過腸上皮細胞表達的受體Dectin-1識別誘導細胞內炎癥反應，增加相關炎癥因子IL-23p19的分泌量；2.Zymosan刺激后，WB觀察到腸上皮細胞胞漿中IκB磷酸化明顯增加，NF-κBp65隨之活化。結論：Zymosan可通過腸道上皮細

6、胞表達的Dectin-1受體識別激活下游促進炎癥反應，參與IBD發(fā)病機制中腸道上皮內屏障的損傷。
　　第三部分 Dectin-1參與結腸上皮細胞炎癥反應及其信號通路調控
　　目的：研究Dectin-1、IL-23p19在IBD患者腸道粘膜中的表達，以及NF-κB途徑相關蛋白激酶磷酸化程度。結果：1.IBD患者糞便樣本中致病性霉菌增多；2.IBD患者結腸粘膜中 Dectin-1、IL-23p19的表達較正常對照組明顯增高(**