腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎關(guān)系的研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者與正常對(duì)照者之間糞便菌群種類(lèi)及特異菌群的定性、定量研究，了解潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群結(jié)構(gòu)差異及數(shù)量的變化，探索腸道菌群與潰瘍性結(jié)腸炎的關(guān)系。
　　方法：收集潰瘍性結(jié)腸炎患者及正常對(duì)照者(各35例)新鮮糞便作為研究標(biāo)本,對(duì)照組在性別、年齡、族別方面與潰瘍性結(jié)腸炎組按1:1方式進(jìn)行匹配，用試劑盒提取糞便細(xì)菌基因組 DNA。根據(jù)細(xì)菌的16SrDNA基因序列設(shè)計(jì) V3區(qū)通用引物，用變性梯度凝膠電泳-聚合酶鏈反應(yīng)

2、法（DGGE-PCR）篩選出兩組腸道菌群的差異結(jié)構(gòu)，將差異條帶切膠回收、純化、克隆后進(jìn)行基因測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)GenBank比對(duì)后確定菌群種類(lèi)。再根據(jù)細(xì)菌的16SrDNA基因序列設(shè)計(jì)大腸埃希菌、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬的種屬特異性引物，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR），定量檢測(cè)出兩組中這三種細(xì)菌的數(shù)量變化。
　　結(jié)果：DGGE-PCR后，潰瘍性結(jié)腸炎患者與正常對(duì)照組之間有多條不同的條帶，其中一條帶在兩組中出現(xiàn)的頻率經(jīng)統(tǒng)

3、計(jì)學(xué)分析后有差異(P﹤0.05)。在GenBank比對(duì)后，確定此菌為不能培養(yǎng)且無(wú)具體歸屬的細(xì)菌；經(jīng) RT-PCR對(duì)大腸埃希菌、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬定量檢測(cè)后，正常對(duì)照組與病例組每克糞便中細(xì)菌的拷貝數(shù)分別為大腸埃希菌(4.62±1.10;5.27±1.02)、乳酸桿菌屬(4.99±0.75;4.65±0.95)，雙歧桿菌屬(5.07±0.95;4.93±0.99)，病例組大腸桿菌數(shù)量明顯增多(t=2.540, P=0.013)，而乳酸及