潰瘍性結(jié)腸炎虛實(shí)證候分型與腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性研究.pdf

1、目的：
　　通過對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者和健康人腸道菌群的多樣性、相似性以及種屬構(gòu)成等研究，闡明UC不同虛實(shí)證候間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性，進(jìn)一步通過虛實(shí)證候與腸道菌群結(jié)構(gòu)差異的差異性分析，為闡明UC虛實(shí)證候的物質(zhì)基礎(chǔ)和病理機(jī)制以及UC不同虛實(shí)證候患者之間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　以UC患者與健康志愿者為研究對(duì)象，建立中醫(yī)證候診斷、納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，分為濕熱內(nèi)蘊(yùn)證組、脾胃氣虛證組、脾虛濕

2、熱證組和健康對(duì)照組，采集糞便標(biāo)本并提取糞便菌群總DNA;經(jīng)16SrDNA V3區(qū)PCR擴(kuò)增后，采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)進(jìn)行腸道菌群DNA指紋圖譜分析;MiSeq測(cè)序技術(shù)開展腸道菌群16SV3+V4區(qū)高通量測(cè)序及生物信息學(xué)分析;基于16 SrDNA指紋圖譜和16SV3+V4區(qū)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)，研究分析UC不同虛實(shí)證候組患者與健康人群腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性。
　　結(jié)果：
　　腸道菌群DNA指紋圖譜分析結(jié)果表明:圖譜中三種證型

3、所呈現(xiàn)的條帶數(shù)沒有明顯差異。三種UC證型患者腸道菌群多樣性、相似性有差異，并且三種UC證型的患者腸道菌群的組內(nèi)相似性系數(shù)高于組間相似性系數(shù)。脾胃氣虛證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最高，脾虛濕熱證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最低。三種證型中，濕熱內(nèi)蘊(yùn)證組UC患者的多樣性指數(shù)最低，脾胃氣虛證組UC患者的多樣性指數(shù)最高。
　　16SV3+V4區(qū)測(cè)序及生物信息學(xué)分析結(jié)果表明:UC患者擬桿菌和厚壁菌門所占比例相對(duì)其他組較大且數(shù)量基本恒定，但它們?cè)诓?/p>

4、同虛實(shí)證候組內(nèi)中所占的比例有顯著差異。厚壁菌門在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P＜0.05)，其中韋榮球菌在厚壁菌門中較為突出，在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P＜0.05)，其在脾胃氣虛組中所含比例高于濕熱內(nèi)蘊(yùn)組(P＜0.05)。變形桿菌門在脾虛濕熱組中所占比例高于脾胃氣虛組(P＜0.05)。變形桿菌門中嗜血桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于脾胃氣虛組和脾虛濕熱組(P＜0.05)。擬桿菌門中擬桿菌和普氏菌在

5、四組中所占比例也有所不同。擬桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于健康人組(P＜0.05)。普氏菌在三組虛實(shí)證型的潰瘍性結(jié)腸炎受試者腸道菌群中所占比例均低于健康人組(P＜0.05)。放線菌門中棒狀桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于脾胃氣虛組(P＜0.05)。真桿菌屬在脾胃氣虛組和脾虛濕熱組中所占比例均小于健康人組(P＜0.05)。
　　DGGE法和測(cè)序結(jié)果反映出的UC患者不同虛實(shí)證候組及健康人組的腸道菌群結(jié)構(gòu)差異性和相似性結(jié)果基本一致。