mTOR-P70S6K信號(hào)通路在腎功能不全大鼠對(duì)比劑急性腎損傷中的作用研究.pdf

1、目的：
　　建立大鼠慢性腎功能不全對(duì)比劑急性腎損傷(CIAKI)模型，探討腎細(xì)胞凋亡在腎功能不全大鼠對(duì)比劑急性腎損傷中的作用。通過(guò)使用 mTOR抑制劑雷帕霉素和激活劑溶血磷脂酸探討 mTOR/P70S6K信號(hào)通路對(duì)腎功能不全大鼠對(duì)比劑急性腎損傷和腎細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：
　　1.利用5/6腎切除術(shù)建立大鼠慢性腎功能不全模型，建模后靜脈給予不同方案的碘海醇誘導(dǎo)對(duì)比劑急性腎損傷，測(cè)定血清肌酐、尿素氮評(píng)估腎功能以確定可

2、靠的建模方案。
　　2.給予溶血磷脂酸和雷帕霉素干預(yù)，觀察其對(duì)對(duì)比劑急性腎損傷的影響。健康雄性清潔級(jí)SD大鼠40只，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為假手術(shù)組(C組， n=8)和5/6腎切除組(n=32)。對(duì)5/6腎切除組行一步法5/6腎切除術(shù)，2周后將其隨機(jī)分為5/6 NE組(NE組，n=8)、5/6 NE+碘海醇組(CIAKI組，n=8)、CIAKI+溶血磷脂酸組（LPA組，n=8）、CIAKI+雷帕霉素組(RAPA組，n=8)。

3、RAPA組每日給予雷帕霉素羧甲基纖維素鈉溶液1mg/kg/d灌胃其他組給予等量羧甲基纖維素鈉(共2周)；2周后LPA組給予1mg/kg溶血磷脂酸靜脈注射，其它組靜脈注射同等量的的磷酸鹽緩沖液；半小時(shí)后CIAKI、LPA、RAPA組大鼠經(jīng)尾靜脈注射20ml/kg碘海醇(350mgI/ml+禁水24小時(shí))誘導(dǎo)CIAKI，其他組給予等量的生理鹽水。
　　3.碘海醇注射24小時(shí)后取尿液1ml用于測(cè)定尿Kim-1；于碘海醇注射后24小時(shí)麻醉

4、大鼠留取下腔靜脈血2ml，處死大鼠，摘取腎組織。一半甲醛固定用做HE染色和 TUNEL染色；另一半超低溫保存用蛋白印記技術(shù)半定量測(cè)定p-mTOR、mTOR、p-P70S6K、P70S6K表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.血清肌酐結(jié)果顯示，尾靜脈注射20ml/kg碘海醇(350mgI/ml)+禁水24小時(shí)成功誘導(dǎo)CIAKI，24小時(shí)后血清肌酐含量均超過(guò)25％達(dá)到對(duì)比劑腎損傷診斷標(biāo)準(zhǔn)，腎功能不全CIAKI模型成功建立。
　　2.

5、各組大鼠一般狀況及腎功能的變化，手術(shù)組和假手術(shù)組基線體重?zé)o顯著差異，左側(cè)腎重及左側(cè)腎重指數(shù)高于假手術(shù)組（P﹤0.05）。碘海醇注射24小時(shí)后CIAKI組肌酐較NE組明顯升高（97.16±9.15 vs77.15±4.30，P﹤0.05），PLA組肌酐較CIAKI組降低（91.23±10.13 vs97.16±9.15，P﹥0.05），但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， PLA組造影后肌酐較RAPA組降低（91.23±10.13 vs106.1±6.31，

6、P﹤0.05）。RAPA組肌酐較CIAKI組升高（106.1±6.31 vs97.16±9.15，P﹤0.05）。CIAKI組較NE組尿kim-1明顯升高（11.72±1.52 vs2.19±0.68，P﹤0.01）。PLA組尿kim-1較CIKIA組顯著減少（8.01±2.77 vs11.72±1.52，P﹤0.01），PLA組尿kim-1較RAPA組顯著減少（8.01±2.77 vs14.49±3.00，P﹤0.01），RAPA組尿

7、kim-1較CIAKI組顯著升高（14.49±3.00 vs11.72±1.52，P﹤0.01）。
　　3. CIAKI組較NE組腎小管損傷評(píng)分顯著升高（17.73±4.2 vs10.84±2.63，P﹤0.05）。LPA組較CIAKI組腎小管損傷評(píng)分降低（15.96±4.77 vs17.73±4.2，P﹤0.05）。LPA組較RAPA組腎小管損傷評(píng)分降低（15.96±4.77 vs19±2.92，P﹤0.05）。RAPA組腎小管

8、損傷評(píng)分較CIAKI組升高（19±2.92 vs17.73±4.2，P﹤0.05）。TUNEL染色比較，NE組較C組凋亡指數(shù)升高（5.35±0.73 vs3.90±0.83， P﹤0.05）。CIAKI組較NE組凋亡明顯增加（16.51±2.43 vs5.35±0.73，P＜0.01）。LPA組較CIAKI組凋亡減少（14.08±3.90 vs16.51±2.43，P＜0.01）。LPA組較RAPA組凋亡減少（14.08±3.90 vs

9、19.01±3.61，P＜0.01）。RAPA組較CIAKI組凋亡明顯增加（19.01±3.61 vs16.51±2.43，P＜0.01）。
　　4. CIAKI組mTOR、P70S6K的磷酸化水平顯著低于NE組，差異具有顯著性(P﹤0.05)，LPA組較CIAKI組mTOR、P70S6K的磷酸化增加(P﹤0.05)，LPA組較 RAPA組 mTOR、P70S6K的磷酸化增加(P﹤0.05)， RAPA組 mTOR(Ser2448

10、)、P70S6K(Thr389)的磷酸化低于CIAKI組（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)大鼠腎功能不全CIAKI模型成功，模型具有重復(fù)性。
　　2.腎功能不全大鼠發(fā)生對(duì)比劑急性腎損傷后腎小管細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡，并且mTOR/P70S6K去磷酸化明顯增加。
　　3.溶血磷脂酸激活了腎組織中mTOR/P70S6K信號(hào)通路減輕了腎功能不全大鼠CIAKI模型中腎小管上皮細(xì)胞凋亡和急性腎損傷。
　　4.