版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、豬傳染性胃腸炎(transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis of swine virus,TGEV)感染引起傳染病,能夠引起仔豬典型胃腸道癥狀甚至死亡。TGEV基因組為不分段的單股正鏈RNA,共編碼四種結(jié)構(gòu)蛋白。目前,對TGEV的纖突糖蛋白S抗原表位的研究非常深入,但是針對膜糖蛋白M抗原表位仍有待深入研究。
2、> 本研究首先通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增了去除信號肽的M基因,并將其插入原核表達(dá)載體pGEX-6p-1。通過優(yōu)化蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的條件,使pGEX-M在“37℃、IPTG終濃度0.5 mM、誘導(dǎo)6h”的條件下,在宿主菌Rossetta中成功表達(dá)了重組TGEV M蛋白。純化的重組TGEV M蛋白為制備抗M蛋白單克隆抗體提供了確實(shí)的實(shí)驗(yàn)材料。
同時,以超速離心得到的TGEV顆粒為免疫原、按照經(jīng)典的單克隆抗體制備方法,成功制備了一
3、株能夠產(chǎn)生抗TGEV M蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,命名為7G7。間接免疫熒光結(jié)果證明,抗M蛋白單克隆抗體可以識別天然狀態(tài)下的TGEV顆粒;Western blot結(jié)果證明,7G7上清也可以與變性條件下的重組M蛋白發(fā)生反應(yīng);對單克隆抗體針對的抗原位點(diǎn)進(jìn)行初步分析,間接ELISA結(jié)果表明,抗原位點(diǎn)位于病毒囊膜外側(cè);對單克隆抗體特異性分析,結(jié)果顯示,7G7上清僅與TGEV發(fā)生反應(yīng)、并不識別其它豬源病毒。以上結(jié)果證明,抗M單克隆抗體可以作為M
4、蛋白抗原位點(diǎn)篩選的良好靶分子。
隨后以純化的腹水為靶分子,通過4輪優(yōu)化的噬菌體篩選步驟,最后隨機(jī)挑取10個噬菌體藍(lán)斑進(jìn)行擴(kuò)增、滴度測定,并檢測它們與靶分子的親和能力。親和能力檢測結(jié)果顯示,10個隨機(jī)噬菌體與靶分子之間都具備高度親和能力。對源于10個隨機(jī)噬菌體的靶向序列進(jìn)行測序,結(jié)果顯示,10個隨機(jī)噬菌體均攜帶相同的外源12肽“VHIDPHHQHDQM”,并命名為phage-V。將外源12肽與M蛋白進(jìn)行序列比對,發(fā)現(xiàn)12肽與
5、M蛋白第197至210位氨基酸具有一定的相似性,其中有三個相近位點(diǎn)的氨基酸完全一致(第199位I、第200位D和第203位P)。最終,競爭性阻斷的結(jié)果表明,phage-V對TGEV或重組M蛋白與單抗的結(jié)合起阻斷作用,而且這種阻斷效果與phage-V的投入量呈正相關(guān)。綜合以上結(jié)果可以證明,通過噬菌體展示技術(shù)篩選出的12肽VHIDPHHQHDQM,既可以直接與抗M蛋白單克隆抗體結(jié)合,又可以競爭性地阻斷病毒或M蛋白與抗體之間的結(jié)合,說明該12
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 豬傳染性胃腸炎病毒單克隆抗體的制備與鑒定.pdf
- 抗豬傳染性胃腸炎病毒S蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf
- 傳染性胃腸炎病毒SAD蛋白單克隆抗體制備與抗原表位鑒定.pdf
- 抗豬傳染性胃腸炎病毒M蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒SC-H株重組N蛋白單克隆抗體的制備.pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒膜蛋白親和多肽的篩選與鑒定.pdf
- DNA免疫制備豬傳染性胃腸炎病毒S基因單克隆抗體和特性分析.pdf
- 雞傳染性法氏囊病毒單克隆抗體識別表位的鑒定.pdf
- 鴨腸炎病毒VP22蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定.pdf
- 豬傳染性胃腸炎
- 抗雞傳染性法氏囊病病毒單克隆抗體的制備及抗原表位初步分析.pdf
- 豬傳染性胃腸炎防治
- 豬傳染性胃腸炎的診治
- 豬傳染性胃腸炎病毒分離及部分特性鑒定.pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒TH-98株S基因的克隆與鑒定.pdf
- 傳染性法氏囊病毒單克隆抗體的制備與應(yīng)用.pdf
- 豬戊型肝炎病毒V1蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定.pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒M蛋白與宿主細(xì)胞相互作用蛋白的篩選鑒定.pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒全基因組克隆及N蛋白的表達(dá).pdf
- 豬傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體的制備及純化工藝研究.pdf
評論
0/150
提交評論