重組豬干擾素α抗豬傳染性胃腸炎病毒的研究.pdf

1、干擾素具有廣譜的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)活性，在機體抵抗外源病毒性病原的感染中發(fā)揮著重要作用。目前已有天然干擾素、原核或真核表達(dá)的重組干擾素應(yīng)用于臨床上病毒性疾病的治療。豬重組干擾素使用大腸桿菌進行可溶性表達(dá)，所表達(dá)的干擾素具有廣譜的抗病毒活性，在多種動物源性的細(xì)胞上顯示出良好的抗病毒能力。本實驗分別使用細(xì)胞和動物感染模型測試重組干擾素對豬傳染性胃腸炎的療效，取得了以下進展:
　　1、將實驗室保存的TGEV SC-T株進行鑒定，然后使用純

2、凈的TGEV SC-T株感染PK15細(xì)胞作為細(xì)胞感染模型測試重組干擾素對TGEV的抑制作用。結(jié)果顯示效價約2×104IU的干擾素樣品經(jīng)倍比稀釋后處理PK15細(xì)胞，并使用TGEV感染細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在32倍稀釋時能夠完全抑制TGEV所致的細(xì)胞病變，與人干擾索標(biāo)準(zhǔn)品顯示出一致的抗病毒能力。通過嗜斑實驗發(fā)現(xiàn)重組干擾素在32倍稀釋時能夠完全抑制TGEV病毒嗜斑的形成，在64倍稀釋時能夠顯著抑制TGEV病毒嗜斑的形成。另外使用半定量RT-PCR和Wec

3、tern-Blot分別檢測預(yù)處理細(xì)胞感染TGEV后病毒核酸和蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示重組干擾素能夠顯著抑制病毒基因組的復(fù)制和TGEV特異性蛋白的在細(xì)胞中的表達(dá)，其效果優(yōu)于干擾素標(biāo)準(zhǔn)品。
　　2、使用不同滴度的TGEV SC-T強毒株感染斷奶仔豬，仔豬感染后均表現(xiàn)出典型的TGE疾病癥狀，使用RT-PCR能夠在糞便中檢測到TGEV的排毒并能在糞便和組織病料中分離到TGEV病毒，通過病理切片分析發(fā)現(xiàn)中劑量和高劑量感染組腸道均出現(xiàn)特征性的

4、病理變化，由此表明使用SC-T株成功構(gòu)建了TGEV的動物感染模型。在此基礎(chǔ)上使用TGEV SC-T株感染斷奶仔豬，然后分別使用不同劑量的重組干擾素進行治療，結(jié)果表明使用2×104和2×105IU連續(xù)三天注射可以得到80％的治愈率。在不同感染時間進行治療結(jié)果表明在感染TGEV的同時注射干擾素可以獲得100％的治愈率而在感染后24h小時治愈率為80％，隨著感染時間的增加治愈率顯著下降。三個批次的干擾素治療實驗結(jié)果均顯示所有三個批次干擾素治愈