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1、該試驗(yàn)用豬睪丸(Swine testicle, ST)細(xì)胞繁殖并擴(kuò)增TGEV自行分離株TH-98,根據(jù)Genebank中已發(fā)表的TGEV S基因cDNA序利,利用Oligo 4.1程序軟件設(shè)計(jì)并合成兩對(duì)引物,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR),分別擴(kuò)增出2.1Kb和2.3Kb兩個(gè)片段,經(jīng)酶切鑒定后,先后插入到pUC18質(zhì)粒載體上的EcoRI和PstI多克隆位點(diǎn)上,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pUC-S.根據(jù)TGEV S基因位點(diǎn)和pUC18的物理
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