雞傳染性法氏囊病毒單克隆抗體識別表位的鑒定.pdf

1、傳染性法氏囊病毒(IBDV)會導(dǎo)致雞發(fā)生嚴重的免疫抑制疾病,從而引起巨大的經(jīng)濟損失。自然條件下,IBDV廣泛存在于周圍環(huán)境中并且可以通過呼吸進行傳播。IBDV感染的靶器官主要是法氏囊,會引起法氏囊腫大和出血等癥狀,使機體的免疫力下降,對其它病原因子的抵抗力下降,從而繼發(fā)感染多種疾病。IBDV抗原結(jié)合表位是病毒分子感染宿主細胞的主要部位,也是藥物治療的靶序列。如果能找到正確的病毒表位,在IBDV感染宿主之前,采取相應(yīng)措施切斷病毒的感染途徑

2、,就能起到很好的保護作用。
　　 本實驗室根據(jù)已經(jīng)報道的VP2蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu),合成了VP2蛋白的五段序列,發(fā)現(xiàn)其中一條多肽P22可能是IBDV的抗原表位。方法本次實驗將P22多肽進行了原核表達,發(fā)現(xiàn)其主要以包涵體形式存在。用鎳柱純化帶His標簽的P22多肽,純化后的P22多肽放入透析袋中透析復(fù)性。SDS-PAGE檢驗多肽的純化程度,Western blot檢測P22多肽的特性。用IBD抗原快速檢測試紙條驗證Western b

3、lot結(jié)果。15日齡的SPF雞頸部皮下接種P22多肽,二免后取P22抗血清。瓊脂擴散實驗和中和效價測定P22抗血清的特異性和保護細胞能力。結(jié)果SDS-PAGE結(jié)果表明獲得了比較純的P22多肽。Western blot結(jié)果表明P22多肽可以和IBDV單抗上清、IBDV標準陽性血清起特異反應(yīng),和IBDV陰性血清不反應(yīng)。P22多肽可以與IBD快速檢測試紙條發(fā)生特異反應(yīng),試紙條的控制線和檢測線均顯示紅色條帶。瓊脂擴散實驗顯示P22抗血清和IBD