Exendin-4類似物對(duì)糖尿病性大鼠視網(wǎng)膜病變的保護(hù)作用及初步機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察exendin-4類似物(Exendin-4 analogue,E4a)對(duì)鏈脲佐菌素(STZ)造模大鼠的血糖和視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)、功能學(xué)的影響。探討Exendin-4類似物參與糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變(Diabetic Retinopathy,DR)的保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)理。
　　 方法:1.建立糖尿病大鼠模型,皮下及玻璃體腔注射exendin-4類似物,化學(xué)法觀察其對(duì)大鼠血糖的影響及對(duì)視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)的影響。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Re

2、verse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印跡(Western immunoblotting,wB)、免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry,IHC)觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜及其他組織胰升糖素樣肽-1受體(Glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)的表達(dá)情況。2.觀察皮下注射exendin-4類似物對(duì)糖尿病大鼠視

3、網(wǎng)膜厚度、細(xì)胞計(jì)數(shù)、視網(wǎng)膜電圖(Electroretinogram,ERG)的影響。3.觀察玻璃體腔內(nèi)注射exendin-4類似物對(duì)糖尿病性大鼠視網(wǎng)膜厚度、細(xì)胞計(jì)數(shù)、視網(wǎng)膜電圖的影響。4.觀察玻璃體腔內(nèi)注射E4a后視網(wǎng)膜谷氨酸含量的變化;免疫組化、蛋白免疫印跡、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)觀察糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(glutamine-aspartate transpor

4、ters,GIAST)的表達(dá)情況;高糖培養(yǎng)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞株,觀察其谷氨酰胺合成酶、谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1,皮下注射Exendin-4類似物0.05 μg/g Bw/day能取得較好的降血糖效果,玻璃體腔內(nèi)注射Exendin-4類似物0.1 μg對(duì)糖尿病引起的視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變的保護(hù)最明顯。糖尿病大鼠視網(wǎng)膜及其他組織如肝、睪丸等在RNA及蛋白水平均有GLP-1R的表達(dá)。2.糖尿病可致大鼠視網(wǎng)膜厚度減小,各層

5、細(xì)胞數(shù)減少、視網(wǎng)膜電圖的振幅降低,而皮下注射E4a可使其受病變影響的程度顯著減小。3.玻璃體腔內(nèi)注射E4a可使糖尿病所致的視網(wǎng)膜變薄、細(xì)胞數(shù)減少、視網(wǎng)膜電圖振幅降低明顯改善;4.玻璃體腔內(nèi)注射E4a后視網(wǎng)膜內(nèi)谷氨酸含量明顯降低;糖尿病大鼠視網(wǎng)膜均有GLP-1R、GIAST的表達(dá),E4a可使其表達(dá)上調(diào);高糖培養(yǎng)的Muller細(xì)胞株上GLP-1R、GLAST表達(dá)減弱,E4a可使其表達(dá)上調(diào)。
　　 結(jié)論:1.皮下注射E4a可使糖尿病大