分泌蛋白OIF在HPA軸中的功能研究.pdf

1、骨生成誘導(dǎo)因子(OIF)是一種分泌蛋白，屬小亮氨酸富集蛋白家族。目前的研究主要集中在對(duì)其結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及與腫瘤的發(fā)生關(guān)系上，這些研究提示OIF蛋白可能具有重要的生理功能，但具體的生理功能尚不明確。
　　 本課題組首次從人垂體組織中克隆了人OIF全長(zhǎng)cDNA，并公布于GenBank;獲得了OIF的原核表達(dá)蛋白，制備了針對(duì)OIF的多克隆抗體及單克隆抗體。我們的研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，OIF在腎上腺組織中有較高表達(dá)，由于垂體-腎上腺在機(jī)體應(yīng)激

2、過(guò)程中發(fā)揮重要作用，故而本實(shí)驗(yàn)對(duì)OIF在下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamuspitutary-adrenal，HPA)軸中的調(diào)控作用進(jìn)行研究，以明確OIF的主要生理功能。
　　 第一部分中。我們首先通過(guò)各組織篩查，發(fā)現(xiàn)OIF在肺和腎上腺組織表達(dá)較高，在垂體中也有一定的表達(dá)。采用原位雜交、免疫組化的方法，發(fā)現(xiàn)其在腎上腺的表達(dá)主要位于皮質(zhì)細(xì)胞中，這為我們進(jìn)一步研究OIF的功能奠定了基礎(chǔ)。在燙傷應(yīng)激、低血糖應(yīng)激時(shí)，North

3、ernblot分析發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激狀態(tài)下腎上腺皮質(zhì)OIF表達(dá)水平下降，但肺組織中OIF表達(dá)不變，這提示OIF可能參與了HPA軸的調(diào)節(jié)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)抑制腎上腺OIF表達(dá)的表達(dá)，肌肉注射地塞米松(DEX)促進(jìn)其表達(dá)。在腎上腺Y1細(xì)胞上，我們發(fā)現(xiàn)ACTH以時(shí)間和劑量依賴性的抑制OIF的表達(dá)，而地塞米松則時(shí)間和劑量依賴性的促進(jìn)OIF的表達(dá)，同時(shí)，我們?cè)谠囵B(yǎng)的腎上腺細(xì)胞上部分重復(fù)了這些結(jié)果，這些結(jié)果提示OIF

4、在HPA軸的調(diào)控中可能起重要作用。通過(guò)在腎上腺Y1細(xì)胞上加入PKA抑制劑H89、cAMP抑制劑SQ22536、PKC抑制劑G06839、JNK抑制劑SP600125、Erk抑制劑pd98059及U0126的方法，我們發(fā)現(xiàn)ACTH抑制OIF是通過(guò)Erk途徑，而排除了其他四種途徑。腹腔注射OIF蛋白后，我們發(fā)現(xiàn)小鼠血漿皮質(zhì)酮的水平明顯升高，在Y1細(xì)胞上我們加入OIF蛋白后，同樣發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)酮的分泌被促進(jìn)。這提示OIF蛋白在受到HPA軸調(diào)控的同時(shí)

5、，也參與了對(duì)HPA軸的調(diào)控，這拓展了人們對(duì)機(jī)體應(yīng)激、HPA軸復(fù)雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的認(rèn)識(shí)。
　　 第二部分中，我們采用OIF基因敲除小鼠模型，進(jìn)一步證實(shí)了OIF在HPA軸中的重要作用。
　　 我們發(fā)現(xiàn)OIF基因敲除鼠，腎上腺皮質(zhì)束狀帶的脂滴沉積發(fā)生改變，這提示OIF可能參與了腎上腺皮質(zhì)脂質(zhì)的代謝，影響了皮質(zhì)酮的合成。OIF基因敲除鼠的皮質(zhì)酮晝夜節(jié)律也發(fā)生改變；在饑餓應(yīng)激、CRH興奮試驗(yàn)時(shí)，ACTH的升高水平發(fā)生異常，而皮質(zhì)酮水平與

6、野生鼠相比卻未見(jiàn)相應(yīng)的改變，這提示OIF可能也參與了HPA軸垂體水平的調(diào)節(jié)，同時(shí)也提示OIF在腎上腺水平對(duì)于皮質(zhì)酮的分泌起到重要作用，在ACTH水平相對(duì)降低的情況下，皮質(zhì)酮的水平卻沒(méi)有改變；在地塞米松抑制試驗(yàn)中，ACTH水平被抑制程度無(wú)明顯異常的情況下，皮質(zhì)酮水平卻被更為明顯地抑制，這可能是由于缺少OIF對(duì)皮質(zhì)酮的正向調(diào)控的原因；ACTH興奮實(shí)驗(yàn)中，OIF基因敲除鼠的皮質(zhì)酮水平與野生型鼠比較無(wú)明顯差異，這可能是因?yàn)锳CTH抑制OIF的表